人抗神經元核抗體2型/抗Ri抗體(ANNA-2/Ri)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
人抗(kang)神經元核抗(kang)體(ti)2型/抗(kang)Ri抗(kang)體(ti)(ANNA-2/Ri)試(shi)劑盒含量(liang)是(shi)固相夾心(xin)法酶(mei)聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測(ce)物(wu)(wu)質濃(nong)度的(de)(de)標準品(pin)(pin)、未知濃(nong)度的(de)(de)樣品(pin)(pin)加(jia)入微孔(kong)酶(mei)標板內進行(xing)檢測(ce)。先將待測(ce)物(wu)(wu)質和生物(wu)(wu)素標記的(de)(de)抗(kang)體(ti)同時溫(wen)(wen)育。洗滌后，加(jia)入親和素標記過(guo)的(de)(de)HRP。再經過(guo)溫(wen)(wen)育和洗滌，去除未結(jie)合(he)的(de)(de)酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)(wu)，然后加(jia)入底物(wu)(wu)A、B，和酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)(wu)同時作用。產生顏色。顏色的(de)(de)深淺和樣品(pin)(pin)中待測(ce)物(wu)(wu)質的(de)(de)濃(nong)度呈(cheng)比例關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標準品(pin)(pin)用標準品(pin)(pin)稀釋液依次做(zuo)倍比稀釋
標本要求：
1．標(biao)本(ben)采(cai)集后(hou)盡早進行(xing)提取(qu)(qu)，提取(qu)(qu)按相關文獻進行(xing)，提取(qu)(qu)后(hou)應盡快進行(xing)實驗(yan)。若不能馬上進行(xing)試驗(yan)，可將標(biao)本(ben)放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的(de)樣(yang)品，因NaN3抑制辣根(gen)過氧化物酶的(de)（HRP）活性(xing)。
操作步驟:
1.加(jia)樣(yang)(yang)：標準(zhun)品(pin)(pin)設定5個濃(nong)度點10個孔(kong)(kong)(kong)(kong)，每個濃(nong)度設定平行孔(kong)(kong)(kong)(kong)，加(jia)入50微升不同(tong)濃(nong)度的標準(zhun)品(pin)(pin)，空白孔(kong)(kong)(kong)(kong)設定1個孔(kong)(kong)(kong)(kong)加(jia)入50微升蒸餾水（空白對照孔(kong)(kong)(kong)(kong)不加(jia)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)及(ji)酶(mei)標試劑，其(qi)余各(ge)步操作相同(tong)）、待測(ce)(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)(kong)，在酶(mei)標包被板(ban)(ban)上待測(ce)(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)(kong)中先加(jia)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然后再加(jia)待測(ce)(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)品(pin)(pin)最(zui)終稀(xi)釋(shi)度為(wei)5倍）。加(jia)樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品(pin)(pin)加(jia)于酶(mei)標板(ban)(ban)孔(kong)(kong)(kong)(kong)底部，盡量(liang)不觸及(ji)孔(kong)(kong)(kong)(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混(hun)勻(yun)。
2.溫育(yu)：用封板(ban)膜(mo)封板(ban)后置37℃溫育(yu)30分(fen)鐘。
3.配液：將30（48T的20倍(bei)(bei)）倍(bei)(bei)濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍(bei)(bei)）倍(bei)(bei)稀釋后備用。
4.洗滌：小心(xin)揭掉封板膜(mo)，棄去(qu)液體，甩干(gan)(gan)，每孔(kong)加滿(man)洗滌液，靜置30秒(miao)后棄去(qu)，如此重復(fu)5次，拍干(gan)(gan)。
5.加酶：每孔(kong)加入酶標(biao)試劑50μl，空白孔(kong)除外。
6.溫育：操(cao)作同3。
7.洗滌：操(cao)作同5。
8.顯(xian)色(se)：每孔先加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)混(hun)勻，37℃避光顯(xian)色(se)15分(fen)鐘(zhong).
9.終(zhong)止(zhi)(zhi)：每(mei)孔加終(zhong)止(zhi)(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)(zhi)反應(ying)（此時(shi)藍色立轉黃色）。
10.測(ce)定：以空(kong)白空(kong)調零(ling)，450nm波長(chang)依(yi)序測(ce)量(liang)各孔(kong)的吸光(guang)度（OD值(zhi)）。測(ce)定應(ying)在加終止液(ye)后15分鐘以內進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷(leng)藏(zang)環境(jing)中取(qu)出應在室溫(wen)平衡15-30分鐘后(hou)方可使(shi)用，酶標包被板(ban)開封(feng)后(hou)如未(wei)用完(wan)，板(ban)條應裝入(ru)密封(feng)袋中保存。
2．濃洗(xi)(xi)滌液(ye)可能會有結晶析出，稀釋(shi)時可在(zai)水浴中加溫助溶，洗(xi)(xi)滌時不(bu)影響結果。
3．各步(bu)加(jia)(jia)樣(yang)均應(ying)使用加(jia)(jia)樣(yang)器，并經常(chang)校對(dui)其準(zhun)確性，以(yi)避免試驗誤(wu)差。一次加(jia)(jia)樣(yang)時間最好(hao)控制在5分鐘內，如標本數量(liang)多，推(tui)薦使用排槍(qiang)加(jia)(jia)樣(yang)。
4．請(qing)每次測(ce)定(ding)的同時做(zuo)標準曲線，最好做(zuo)復孔。如標本中待測(ce)物(wu)質含量過高（樣本OD值(zhi)大(da)于標準品(pin)孔第一孔的OD值(zhi)），請(qing)先用樣品(pin)稀釋液稀釋一定(ding)倍數（n倍）后再(zai)測(ce)定(ding)，計算時請(qing)最后乘以(yi)總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避(bi)免交叉污染。
6．底物請避(bi)光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行(xing)，試驗結(jie)果判(pan)定必(bi)須以酶標儀讀(du)數為(wei)準.
8．所有(you)樣品(pin)，洗滌液和各種廢棄物都應按(an)傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hao)組分(fen)不得(de)混用。
11.如與(yu)英(ying)文說明書有異(yi)，以(yi)英(ying)文說明書為準。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪(hui)出(chu)標準曲(qu)線，根據樣(yang)品的OD
值由標(biao)準曲(qu)線(xian)查(cha)出相應的(de)濃度；再乘(cheng)以稀(xi)釋倍數；或用標(biao)準物(wu)的(de)濃度與OD值計算出標(biao)
準曲線的直(zhi)線回歸方(fang)程式，將樣品的OD值(zhi)代入方(fang)程式，計(ji)算出樣品濃度，再乘(cheng)以稀釋
倍數，即為樣品的實際濃(nong)度(du)。
試劑盒性能(neng)：
1.樣品線性回(hui)歸與預期(qi)濃度相關系數R值為0.990以上。
2.批內(nei)與批間應分別小于9%和(he)11%
保存條件及(ji)有效期：
1.試劑盒保(bao)存：；2-8℃。
2．有(you)效期：6個(ge)月
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