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elisa試劑盒

人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)ELISA Kit
產品簡介:英文名:Human heparin sulphate protoglycans,HSPG ELISA Kit 相關類別:ELISA儲存條件:2-8℃產品編號:kt20304 貨號:69-20304
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人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)酶聯免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
實驗原理:
人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)試劑盒含量是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系

試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1份 1份
封板膜 2片(48) 2片(96)
密封袋 1個 1個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存


注:標(biao)準(zhun)品用(yong)標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)依次做(zuo)倍比稀(xi)釋(shi)
標本要求:
1.標本(ben)采(cai)集后(hou)盡(jin)早進行(xing)提(ti)取(qu),提(ti)取(qu)按相關(guan)文獻進行(xing),提(ti)取(qu)后(hou)應盡(jin)快進行(xing)實驗。若不能馬上進行(xing)試驗,可將標本(ben)放于-20℃保存,但應避免(mian)反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑(yi)制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
1.加(jia)樣(yang):標(biao)準(zhun)品設(she)定5個濃度(du)點(dian)10個孔(kong)(kong),每個濃度(du)設(she)定平行孔(kong)(kong),加(jia)入(ru)50微升不(bu)同(tong)濃度(du)的標(biao)準(zhun)品,空白孔(kong)(kong)設(she)定1個孔(kong)(kong)加(jia)入(ru)50微升蒸餾水(空白對(dui)照孔(kong)(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品及(ji)(ji)酶標(biao)試劑,其余各步(bu)操作(zuo)相同(tong))、待測(ce)樣(yang)品孔(kong)(kong),在酶標(biao)包被板上待測(ce)樣(yang)品孔(kong)(kong)中先加(jia)樣(yang)品稀釋液40μl,然后再加(jia)待測(ce)樣(yang)品10μl(樣(yang)品最終稀釋度(du)為(wei)5倍(bei))。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品加(jia)于酶標(biao)板孔(kong)(kong)底部(bu),盡量不(bu)觸及(ji)(ji)孔(kong)(kong)壁(bi),輕輕晃動混勻。
2.溫(wen)育:用封(feng)板膜封(feng)板后置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘。
3.配液(ye):將30(48T的(de)20倍(bei))倍(bei)濃(nong)縮洗(xi)滌液(ye)用蒸餾水30(48T的(de)20倍(bei))倍(bei)稀(xi)釋(shi)后備用。
4.洗滌:小心揭(jie)掉封(feng)板膜,棄去(qu)(qu)液(ye)體,甩干,每孔加滿(man)洗滌液(ye),靜(jing)置30秒后(hou)棄去(qu)(qu),如(ru)此重復5次(ci),拍干。
5.加(jia)酶:每孔加(jia)入酶標試劑50μl,空白(bai)孔除(chu)外(wai)。
6.溫(wen)育:操作同(tong)2。
7.洗滌:操作同(tong)4。
8.顯(xian)色:每孔先加(jia)入(ru)顯(xian)色劑(ji)(ji)A50μl,再(zai)加(jia)入(ru)顯(xian)色劑(ji)(ji)B50μl,輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混勻,37℃避光(guang)顯(xian)色15分鐘.
9.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時(shi)藍(lan)色立(li)轉黃(huang)色)。
10.測定(ding):以(yi)空(kong)(kong)白空(kong)(kong)調零,450nm波長(chang)依序測量各孔(kong)的吸(xi)光度(du)(OD值)。測定(ding)應在加(jia)終止(zhi)液后15分鐘以(yi)內進行。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huan)境中(zhong)取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可(ke)使用,酶標(biao)包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中(zhong)保存。
2.濃洗(xi)滌液可(ke)能(neng)會(hui)有結晶析出,稀釋時可(ke)在水浴中加溫(wen)助溶,洗(xi)滌時不(bu)影響結果。
3.各步加(jia)樣均應使用加(jia)樣器,并經常(chang)校對其準確性,以避免試驗誤差。一(yi)次加(jia)樣時間最好(hao)控制在(zai)5分鐘內,如標本數(shu)量(liang)多,推薦使用排槍加(jia)樣。
4.請(qing)每次測定的(de)同時做標準曲線(xian),最(zui)好做復孔。如標本(ben)中待測物質含(han)量(liang)過高(樣本(ben)OD值(zhi)大于標準品孔第(di)一(yi)孔的(de)OD值(zhi)),請(qing)先用樣品稀釋(shi)(shi)液(ye)稀釋(shi)(shi)一(yi)定倍數(n倍)后再測定,計算時請(qing)最(zui)后乘以總稀釋(shi)(shi)倍數(×n×5)。
5.封板(ban)膜只限一次性(xing)使用,以(yi)避免交(jiao)叉污染。
6.底物(wu)請避光保存。
7.嚴(yan)格按照說明書(shu)的(de)操作進行,試(shi)驗結果判定(ding)必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按(an)傳染物處理。
9.本試(shi)劑不同批號組分(fen)不得混用。
11.如與英文(wen)說(shuo)明書有異(yi),以(yi)英文(wen)說(shuo)明書為(wei)準。
計算:
以標(biao)準(zhun)物的(de)濃度為(wei)橫坐標(biao),OD值為(wei)縱坐標(biao),在坐標(biao)紙上繪出標(biao)準(zhun)曲線,根(gen)據樣品的(de)OD
值由標準曲線查出相應的(de)(de)濃(nong)度;再乘以稀(xi)釋(shi)倍數;或(huo)用標準物的(de)(de)濃(nong)度與OD值計算出標
準曲線(xian)的直線(xian)回(hui)歸(gui)方(fang)程式(shi),將樣品(pin)的OD值代入方(fang)程式(shi),計算出樣品(pin)濃度,再乘以稀(xi)釋
倍(bei)數,即為樣(yang)品的(de)實際濃度。
試(shi)劑盒性(xing)能:
1.樣品線性(xing)回歸與預(yu)期濃(nong)度相關(guan)系數R值為0.990以上。
2.批內與(yu)批間應(ying)分別小(xiao)于9%和11%
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有(you)效期:6個月
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