人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
人胎盤核糖核酸抑止劑(ji)(HPRI)試劑(ji)盒(he)含量(liang)是固相夾(jia)心(xin)法(fa)酶(mei)聯(lian)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待(dai)(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)質濃(nong)度的(de)標準品(pin)、未知濃(nong)度的(de)樣(yang)品(pin)加入微孔酶(mei)標板內進行檢測(ce)(ce)。先將待(dai)(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)質和生(sheng)物(wu)(wu)素標記的(de)抗體同(tong)時(shi)溫(wen)育。洗滌(di)后(hou)，加入親和素標記過的(de)HRP。再經過溫(wen)育和洗滌(di)，去除未結合的(de)酶(mei)結合物(wu)(wu)，然(ran)后(hou)加入底物(wu)(wu)A、B，和酶(mei)結合物(wu)(wu)同(tong)時(shi)作用。產生(sheng)顏色。顏色的(de)深淺和樣(yang)品(pin)中待(dai)(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)質的(de)濃(nong)度呈比例關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標準(zhun)品用標準(zhun)品稀釋液依次做(zuo)倍比稀釋
標本要求：
1．標本(ben)采集后盡早(zao)進(jin)行提取(qu)(qu)，提取(qu)(qu)按相(xiang)關文獻進(jin)行，提取(qu)(qu)后應(ying)盡快進(jin)行實驗。若(ruo)不能馬上(shang)進(jin)行試驗，可將標本(ben)放于-20℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避免反(fan)復凍融
2．不能(neng)檢測(ce)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物(wu)酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.加樣(yang)(yang)：標準品(pin)(pin)設定5個(ge)濃(nong)度(du)點10個(ge)孔(kong)(kong)(kong)，每個(ge)濃(nong)度(du)設定平行孔(kong)(kong)(kong)，加入50微(wei)升(sheng)不(bu)同濃(nong)度(du)的標準品(pin)(pin)，空白(bai)孔(kong)(kong)(kong)設定1個(ge)孔(kong)(kong)(kong)加入50微(wei)升(sheng)蒸餾水(shui)（空白(bai)對照孔(kong)(kong)(kong)不(bu)加樣(yang)(yang)品(pin)(pin)及酶標試(shi)劑，其余各步操作相同）、待(dai)測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)，在(zai)酶標包被板上待(dai)測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)中先(xian)加樣(yang)(yang)品(pin)(pin)稀(xi)釋液40μl，然后再加待(dai)測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)品(pin)(pin)最終(zhong)稀(xi)釋度(du)為5倍）。加樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品(pin)(pin)加于(yu)酶標板孔(kong)(kong)(kong)底部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸及孔(kong)(kong)(kong)壁，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)晃動混勻。
2.溫(wen)育：用封板(ban)(ban)膜封板(ban)(ban)后置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。
3.配(pei)液(ye)：將30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃(nong)縮洗滌液(ye)用蒸餾水30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀(xi)釋后備用。
4.洗(xi)滌：小心揭(jie)掉封板膜，棄去液體(ti)，甩干，每孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌液，靜置30秒后棄去，如(ru)此重(zhong)復5次，拍干。
5.加酶(mei)：每孔加入酶(mei)標試劑50μl，空白孔除外。
6.溫育：操作同2。
7.洗(xi)滌：操作同4。
8.顯(xian)色(se)：每(mei)孔先加入顯(xian)色(se)劑A50μl，再加入顯(xian)色(se)劑B50μl，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)震蕩混勻，37℃避光顯(xian)色(se)15分鐘.
9.終(zhong)(zhong)止：每孔加終(zhong)(zhong)止液50μl，終(zhong)(zhong)止反應（此(ci)時(shi)藍(lan)色立轉(zhuan)黃色）。
10.測定：以空(kong)白空(kong)調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值(zhi)）。測定應(ying)在加終止液后(hou)15分鐘以內進行。
注意事項：
1．試(shi)劑盒從冷(leng)藏環境中(zhong)取出應(ying)在(zai)室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開(kai)封后如未用完，板條應(ying)裝入密封袋中(zhong)保存。
2．濃洗滌(di)液可能會有結(jie)晶析(xi)出，稀釋時(shi)(shi)可在(zai)水(shui)浴(yu)中(zhong)加(jia)溫助溶，洗滌(di)時(shi)(shi)不影響(xiang)結(jie)果。
3．各(ge)步加(jia)樣(yang)均應使用加(jia)樣(yang)器，并經(jing)常校(xiao)對其準確性，以避免試驗誤差。一次(ci)加(jia)樣(yang)時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推(tui)薦(jian)使用排(pai)槍加(jia)樣(yang)。
4．請每次(ci)測定(ding)的同(tong)時做(zuo)標(biao)(biao)準(zhun)曲線，最好做(zuo)復孔(kong)。如(ru)標(biao)(biao)本中待測物質含量過(guo)高(gao)（樣本OD值(zhi)大于標(biao)(biao)準(zhun)品孔(kong)第(di)一孔(kong)的OD值(zhi)），請先用樣品稀釋液稀釋一定(ding)倍(bei)數（n倍(bei)）后再測定(ding)，計算時請最后乘以總稀釋倍(bei)數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉(cha)污染。
6．底物請(qing)避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jie)果判(pan)定必(bi)須以酶(mei)標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗(xi)滌(di)液(ye)和各種廢棄物都應按傳染物處(chu)理(li)。
9．本試(shi)劑不同批號(hao)組分(fen)不得混用。
11.如與(yu)英文說明書有(you)異，以英文說明書為準。
計算：
以(yi)標準物(wu)的濃度為橫坐(zuo)(zuo)標，OD值為縱坐(zuo)(zuo)標，在坐(zuo)(zuo)標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD
值(zhi)由標準曲線(xian)查出(chu)相(xiang)應(ying)的濃度；再乘(cheng)以(yi)稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值(zhi)計算出(chu)標
準曲線(xian)的(de)直線(xian)回歸方程式(shi)，將樣(yang)品(pin)的(de)OD值代入方程式(shi)，計(ji)算出樣(yang)品(pin)濃度，再乘以稀釋
倍數，即為樣(yang)品的實際(ji)濃度(du)。
試(shi)劑盒性能：
1.樣品線性(xing)回歸與預(yu)期濃度相關系數(shu)R值為0.990以上。
2.批(pi)內(nei)與(yu)批(pi)間應分別小于9%和11%
保存(cun)條(tiao)件及有效(xiao)期：
1.試劑(ji)盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
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