小鼠磷脂酶A2(PL-A2)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
小(xiao)鼠磷脂酶(mei)A2(PL-A2)試劑盒含量是固相(xiang)夾心(xin)法酶(mei)聯免(mian)疫吸(xi)附實驗(yan)（ELISA）.已(yi)知待測(ce)物(wu)(wu)質(zhi)濃(nong)(nong)度的(de)標準品、未知濃(nong)(nong)度的(de)樣(yang)品加(jia)入微孔酶(mei)標板內進行檢測(ce)。先(xian)將(jiang)待測(ce)物(wu)(wu)質(zhi)和(he)(he)生物(wu)(wu)素標記的(de)抗體(ti)同時溫育。洗(xi)滌后，加(jia)入親和(he)(he)素標記過的(de)HRP。再經過溫育和(he)(he)洗(xi)滌，去除未結(jie)合(he)(he)的(de)酶(mei)結(jie)合(he)(he)物(wu)(wu)，然后加(jia)入底物(wu)(wu)A、B，和(he)(he)酶(mei)結(jie)合(he)(he)物(wu)(wu)同時作用(yong)。產生顏色。顏色的(de)深淺和(he)(he)樣(yang)品中待測(ce)物(wu)(wu)質(zhi)的(de)濃(nong)(nong)度呈比例關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標(biao)準品用標(biao)準品稀釋(shi)液依次(ci)做(zuo)倍比稀釋(shi)
標本要求：
1．標本采集(ji)后盡早(zao)進(jin)行提取，提取按相(xiang)關文獻進(jin)行，提取后應盡快(kuai)進(jin)行實驗(yan)。若不能馬上進(jin)行試驗(yan)，可將標本放于-20℃保存，但(dan)應避(bi)免反復凍融(rong)
2．不能檢測含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑制辣根(gen)過氧(yang)化物酶的(de)（HRP）活性(xing)。
操作步驟:
1.加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)：標準品(pin)設(she)定5個(ge)(ge)濃(nong)度(du)(du)點10個(ge)(ge)孔(kong)，每個(ge)(ge)濃(nong)度(du)(du)設(she)定平行孔(kong)，加(jia)(jia)入(ru)50微升(sheng)不同濃(nong)度(du)(du)的標準品(pin)，空白孔(kong)設(she)定1個(ge)(ge)孔(kong)加(jia)(jia)入(ru)50微升(sheng)蒸餾水(shui)（空白對照孔(kong)不加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)及(ji)酶標試劑，其余各(ge)步操作相同）、待(dai)(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔(kong)，在酶標包被板上待(dai)(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔(kong)中(zhong)先加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)稀釋液40μl，然后再加(jia)(jia)待(dai)(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)最終稀釋度(du)(du)為(wei)5倍）。加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)加(jia)(jia)于酶標板孔(kong)底(di)部(bu)，盡量(liang)不觸(chu)及(ji)孔(kong)壁(bi)，輕輕晃動混勻。
2.溫(wen)育：用封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)后置37℃溫(wen)育30分鐘。
3.配液：將30（48T的(de)20倍(bei)(bei)）倍(bei)(bei)濃(nong)縮洗滌液用(yong)蒸餾水30（48T的(de)20倍(bei)(bei)）倍(bei)(bei)稀釋后(hou)備用(yong)。
4.洗滌：小心(xin)揭掉封(feng)板膜，棄去液(ye)體，甩干，每孔加滿(man)洗滌液(ye)，靜置30秒后棄去，如此重(zhong)復5次，拍干。
5.加酶(mei)：每孔(kong)加入酶(mei)標試劑50μl，空白孔(kong)除外。
6.溫育：操作同2。
7.洗(xi)滌：操作同4。
8.顯(xian)(xian)色(se)(se)：每孔先加入顯(xian)(xian)色(se)(se)劑(ji)A50μl，再加入顯(xian)(xian)色(se)(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避光顯(xian)(xian)色(se)(se)15分鐘.
9.終(zhong)止：每(mei)孔(kong)加終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應（此時藍(lan)色立轉黃(huang)色）。
10.測定：以(yi)空白空調零，450nm波長依(yi)序測量(liang)各孔的吸光度（OD值）。測定應(ying)在加終(zhong)止(zhi)液(ye)后15分鐘以(yi)內進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環境中(zhong)取(qu)出(chu)應在(zai)室(shi)溫平衡15-30分鐘(zhong)后方(fang)可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋(dai)中(zhong)保存。
2．濃洗(xi)滌(di)液可(ke)能(neng)會有結晶(jing)析出(chu)，稀釋時可(ke)在水浴中加溫助溶，洗(xi)滌(di)時不影(ying)響結果。
3．各步加(jia)樣均應使用(yong)(yong)加(jia)樣器(qi)，并經常校對(dui)其(qi)準(zhun)確性，以(yi)避免試驗誤差。一次加(jia)樣時(shi)間(jian)最好(hao)控制在5分鐘內，如標本(ben)數量多，推薦使用(yong)(yong)排(pai)槍加(jia)樣。
4．請每(mei)次測定(ding)的(de)同時做(zuo)標(biao)準曲線，最好做(zuo)復孔。如標(biao)本(ben)中(zhong)待測物質(zhi)含量過高（樣(yang)本(ben)OD值大于標(biao)準品(pin)孔第(di)一孔的(de)OD值），請先用樣(yang)品(pin)稀釋液稀釋一定(ding)倍(bei)(bei)數(shu)（n倍(bei)(bei)）后再測定(ding)，計算時請最后乘以總(zong)稀釋倍(bei)(bei)數(shu)（×n×5）。
5．封(feng)板膜只限一次性使用，以避免(mian)交叉污染(ran)。
6．底物請(qing)避光保(bao)存。
7．嚴格按(an)照說明書(shu)的操(cao)作進行，試驗(yan)結果判定(ding)必須以(yi)酶標儀讀數(shu)為準(zhun).
8．所有樣品，洗滌(di)液和各種廢棄(qi)物都應按(an)傳染物處(chu)理。
9．本(ben)試(shi)劑(ji)不同批號組分不得混用。
11.如(ru)與英(ying)文說明書(shu)有異，以(yi)英(ying)文說明書(shu)為準(zhun)。
計算：
以標(biao)準物的(de)濃度為橫坐(zuo)標(biao)，OD值為縱坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上(shang)繪出標(biao)準曲(qu)線(xian)，根據(ju)樣品的(de)OD
值由標(biao)準曲線查出相應(ying)的(de)濃(nong)度；再乘以稀釋倍數；或用標(biao)準物的(de)濃(nong)度與OD值計算出標(biao)
準曲(qu)線(xian)的(de)(de)直線(xian)回歸方(fang)程(cheng)式(shi)，將樣品(pin)的(de)(de)OD值代入方(fang)程(cheng)式(shi)，計算出(chu)樣品(pin)濃度，再(zai)乘以(yi)稀釋
倍數，即為樣(yang)品的實際濃度(du)。
試劑盒性能(neng)：
1.樣品線性回歸與預期(qi)濃度相(xiang)關系數(shu)R值(zhi)為0.990以上(shang)。
2.批內與批間應分別小于9%和11%
保存條件及有(you)效期：
1.試劑盒保存(cun)：；2-8℃。
2．有效(xiao)期：6個月
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