小鼠低氧誘導因子1α(HIF-1α)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
小鼠低氧誘(you)導因子1α(HIF-1α)試(shi)劑盒含量是(shi)固(gu)相夾心法酶(mei)(mei)聯(lian)免疫吸(xi)附(fu)實驗（ELISA）.已知待(dai)測物(wu)(wu)(wu)質(zhi)濃(nong)度的(de)標(biao)(biao)準品(pin)、未知濃(nong)度的(de)樣(yang)品(pin)加(jia)入微(wei)孔酶(mei)(mei)標(biao)(biao)板內(nei)進行檢(jian)測。先將(jiang)待(dai)測物(wu)(wu)(wu)質(zhi)和(he)(he)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)素標(biao)(biao)記(ji)的(de)抗體同時溫育。洗滌(di)后，加(jia)入親和(he)(he)素標(biao)(biao)記(ji)過的(de)HRP。再(zai)經過溫育和(he)(he)洗滌(di)，去除未結(jie)合(he)的(de)酶(mei)(mei)結(jie)合(he)物(wu)(wu)(wu)，然后加(jia)入底物(wu)(wu)(wu)A、B，和(he)(he)酶(mei)(mei)結(jie)合(he)物(wu)(wu)(wu)同時作用(yong)。產生(sheng)顏(yan)色。顏(yan)色的(de)深淺(qian)和(he)(he)樣(yang)品(pin)中待(dai)測物(wu)(wu)(wu)質(zhi)的(de)濃(nong)度呈比例關系。
試劑盒組成：
|
試劑盒組成
|
48孔配置
|
96孔配置
|
保存
|
|
說明書
|
1份
|
1份
|
|
|
封板膜
|
2片（48）
|
2片（96）
|
|
|
密封袋
|
1個
|
1個
|
|
|
酶標包被板
|
1×48
|
1×96
|
2-8℃保存
|
|
標準品
|
0.5ml×1瓶
|
0.5ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
標準品稀釋液
|
1.5ml×1瓶
|
1.5ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
酶標試劑
|
3 ml×1瓶
|
6 ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
樣品稀釋液
|
3 ml×1瓶
|
6 ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
顯色劑A液
|
3 ml×1瓶
|
6 ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
顯色劑B液
|
3 ml×1瓶
|
6 ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
終止液
|
3ml×1瓶
|
6ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
濃縮洗滌液
|
（20ml×20倍）×1瓶
|
（20ml×30倍）×1瓶
|
2-8℃保存
|
注：標(biao)(biao)準品用標(biao)(biao)準品稀釋液依(yi)次做倍(bei)比稀釋
標本要求：
1．標本(ben)采集(ji)后盡(jin)早進行(xing)提取，提取按相關文(wen)獻(xian)進行(xing)，提取后應盡(jin)快(kuai)進行(xing)實驗。若不能馬上進行(xing)試(shi)驗，可(ke)將標本(ben)放于-20℃保存(cun)，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的(de)樣(yang)品(pin)，因(yin)NaN3抑制辣根(gen)過氧化物酶(mei)的(de)（HRP）活性。
操作步驟:
1.加(jia)樣(yang)：標(biao)準(zhun)品(pin)設定(ding)5個(ge)濃度(du)(du)點10個(ge)孔(kong)(kong)(kong)，每個(ge)濃度(du)(du)設定(ding)平(ping)行孔(kong)(kong)(kong)，加(jia)入50微(wei)升(sheng)不同濃度(du)(du)的標(biao)準(zhun)品(pin)，空白孔(kong)(kong)(kong)設定(ding)1個(ge)孔(kong)(kong)(kong)加(jia)入50微(wei)升(sheng)蒸(zheng)餾水（空白對照(zhao)孔(kong)(kong)(kong)不加(jia)樣(yang)品(pin)及酶標(biao)試劑(ji)，其余(yu)各步操作相同）、待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)(kong)(kong)，在酶標(biao)包被板上待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)先加(jia)樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液40μl，然后再(zai)加(jia)待測(ce)樣(yang)品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)最終稀釋(shi)度(du)(du)為(wei)5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)加(jia)于酶標(biao)板孔(kong)(kong)(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)(kong)(kong)壁，輕輕晃動混勻。
2.溫(wen)育：用封(feng)板膜封(feng)板后(hou)置37℃溫(wen)育30分鐘。
3.配液(ye)(ye)：將30（48T的20倍(bei)）倍(bei)濃縮洗滌液(ye)(ye)用(yong)蒸餾水30（48T的20倍(bei)）倍(bei)稀釋(shi)后備用(yong)。
4.洗滌：小心揭掉封(feng)板膜，棄(qi)去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄(qi)去，如此(ci)重復5次，拍干。
5.加酶(mei)：每(mei)孔(kong)(kong)加入酶(mei)標試劑50μl，空白(bai)孔(kong)(kong)除外。
6.溫育：操作同2。
7.洗滌：操作同4。
8.顯色(se)：每孔先加(jia)入顯色(se)劑A50μl，再(zai)加(jia)入顯色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)混勻(yun)，37℃避光(guang)顯色(se)15分鐘.
9.終(zhong)止：每(mei)孔加終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應（此時藍色(se)立(li)轉黃(huang)色(se)）。
10.測定(ding)：以空(kong)(kong)白空(kong)(kong)調零(ling)，450nm波長依序測量各(ge)孔的吸光度(du)（OD值）。測定(ding)應在加終止(zhi)液(ye)后15分鐘以內進(jin)行。
注意事項：
1．試(shi)劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶(mei)標(biao)包被(bei)板開(kai)封(feng)后如未(wei)用完，板條(tiao)應裝入(ru)密封(feng)袋中保存(cun)。
2．濃洗滌液可(ke)能會(hui)有(you)結晶(jing)析出(chu)，稀釋時(shi)可(ke)在水浴(yu)中加溫助(zhu)溶，洗滌時(shi)不影響(xiang)結果。
3．各(ge)步加樣(yang)(yang)均應使(shi)用(yong)加樣(yang)(yang)器(qi)，并經(jing)常校對其(qi)準(zhun)確性，以避免試驗誤(wu)差。一次加樣(yang)(yang)時(shi)間最好控制在(zai)5分鐘內，如標本數量多，推薦使(shi)用(yong)排槍(qiang)加樣(yang)(yang)。
4．請(qing)每(mei)次測(ce)(ce)定(ding)的同時做標準曲線(xian)，最好做復孔。如標本中待測(ce)(ce)物質含量(liang)過高（樣(yang)本OD值大于標準品(pin)孔第(di)一孔的OD值），請(qing)先(xian)用(yong)樣(yang)品(pin)稀(xi)(xi)釋液稀(xi)(xi)釋一定(ding)倍(bei)數（n倍(bei)）后(hou)再(zai)測(ce)(ce)定(ding)，計算(suan)時請(qing)最后(hou)乘以總稀(xi)(xi)釋倍(bei)數（×n×5）。
5．封板膜只(zhi)限一(yi)次性使用，以避免交叉污(wu)染。
6．底(di)物請避光(guang)保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗(yan)結(jie)果判定必須以(yi)酶標儀讀數為準(zhun).
8．所(suo)有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處(chu)理。
9．本試劑不同批號組(zu)分不得(de)混用。
11.如與英文說明(ming)書有異，以(yi)英文說明(ming)書為(wei)準。
計算：
以標準物的濃度為橫(heng)坐(zuo)標，OD值為縱(zong)坐(zuo)標，在(zai)坐(zuo)標紙上繪出(chu)標準曲線，根據樣品(pin)的OD
值(zhi)由標準(zhun)曲線查出相應的濃度；再(zai)乘(cheng)以(yi)稀釋倍(bei)數；或用(yong)標準(zhun)物的濃度與OD值(zhi)計算(suan)出標
準曲線的直線回(hui)歸方(fang)程(cheng)式(shi)，將樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)代入方(fang)程(cheng)式(shi)，計算出樣(yang)品(pin)濃度，再乘(cheng)以稀釋
倍(bei)數(shu)，即為樣品的實(shi)際濃度。
試劑盒性能：
1.樣(yang)品線性(xing)回歸與預(yu)期濃度相關系數R值為0.990以上。
2.批內(nei)與批間應(ying)分(fen)別(bie)小于(yu)9%和(he)11%
保(bao)存條件及(ji)有(you)效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效(xiao)期：6個月
購物車
點擊咨詢
2505646471
400-8830-979 