小鼠纖連蛋白(FN)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
小鼠纖連蛋(dan)白(FN)試劑盒含量是固(gu)相(xiang)夾(jia)心法酶聯(lian)免(mian)疫吸附實驗(yan)（ELISA）.已知待測物(wu)(wu)質(zhi)濃(nong)度的(de)(de)(de)(de)標(biao)準品、未知濃(nong)度的(de)(de)(de)(de)樣品加(jia)入微孔酶標(biao)板內(nei)進行檢測。先將待測物(wu)(wu)質(zhi)和(he)(he)生物(wu)(wu)素(su)標(biao)記(ji)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)體同時(shi)溫育(yu)。洗(xi)滌(di)后，加(jia)入親和(he)(he)素(su)標(biao)記(ji)過(guo)的(de)(de)(de)(de)HRP。再經過(guo)溫育(yu)和(he)(he)洗(xi)滌(di)，去除未結合的(de)(de)(de)(de)酶結合物(wu)(wu)，然后加(jia)入底物(wu)(wu)A、B，和(he)(he)酶結合物(wu)(wu)同時(shi)作用。產生顏色。顏色的(de)(de)(de)(de)深淺(qian)和(he)(he)樣品中(zhong)待測物(wu)(wu)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)濃(nong)度呈比例(li)關(guan)系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注(zhu)：標準(zhun)品(pin)用標準(zhun)品(pin)稀釋液依次(ci)做倍比稀釋
標本要求：
1．標本采集(ji)后(hou)盡(jin)早進行提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相(xiang)關文獻進行，提(ti)取(qu)后(hou)應盡(jin)快進行實驗。若不能(neng)馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不(bu)能檢(jian)測含NaN3的樣(yang)品(pin)，因NaN3抑制辣(la)根過(guo)氧化物(wu)酶(mei)的（HRP）活性。
操作步驟:
1.加樣(yang)(yang)(yang)：標準品(pin)(pin)(pin)設定5個濃(nong)度(du)(du)點10個孔(kong)，每個濃(nong)度(du)(du)設定平行孔(kong)，加入50微(wei)升不同濃(nong)度(du)(du)的(de)標準品(pin)(pin)(pin)，空白(bai)孔(kong)設定1個孔(kong)加入50微(wei)升蒸餾水（空白(bai)對照孔(kong)不加樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)及酶標試(shi)劑，其余(yu)各步操作(zuo)相同）、待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)，在酶標包被板上(shang)待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)中先加樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋液40μl，然后再加待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)最終稀(xi)(xi)釋度(du)(du)為5倍(bei)）。加樣(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)加于酶標板孔(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)壁，輕輕晃動混勻。
2.溫(wen)(wen)育(yu)：用(yong)封板膜封板后(hou)置37℃溫(wen)(wen)育(yu)30分鐘。
3.配液：將(jiang)30（48T的20倍）倍濃縮(suo)洗(xi)滌液用蒸餾(liu)水30（48T的20倍）倍稀釋后備(bei)用。
4.洗滌(di)：小心揭(jie)掉封板膜，棄去(qu)液體，甩干(gan)，每孔加滿洗滌(di)液，靜置30秒后棄去(qu)，如此重復5次，拍干(gan)。
5.加酶：每孔(kong)(kong)加入(ru)酶標試劑50μl，空白(bai)孔(kong)(kong)除外。
6.溫育：操作同2。
7.洗滌：操作同4。
8.顯(xian)(xian)色(se)：每(mei)孔先加(jia)入顯(xian)(xian)色(se)劑A50μl，再加(jia)入顯(xian)(xian)色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混勻，37℃避(bi)光顯(xian)(xian)色(se)15分鐘.
9.終(zhong)(zhong)(zhong)止(zhi)：每孔加終(zhong)(zhong)(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)(zhong)(zhong)止(zhi)反應（此時(shi)藍色(se)立(li)轉黃色(se)）。
10.測(ce)定：以空白空調零，450nm波長依序(xu)測(ce)量各孔的(de)吸光度（OD值）。測(ce)定應在加終止液后15分鐘以內進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huan)境中取出(chu)應在室溫平衡15-30分鐘后(hou)方可使用，酶標(biao)包被(bei)板(ban)開封后(hou)如未用完，板(ban)條應裝入密封袋中保存。
2．濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)可(ke)能會有結(jie)晶析出，稀(xi)釋(shi)時(shi)可(ke)在水浴中加溫助溶，洗(xi)滌(di)時(shi)不影(ying)響結(jie)果。
3．各步加(jia)樣(yang)均應使(shi)用(yong)(yong)加(jia)樣(yang)器(qi)，并(bing)經(jing)常校(xiao)對(dui)其(qi)準(zhun)確性(xing)，以避免試驗誤差。一次加(jia)樣(yang)時間最好控制在5分鐘內(nei)，如標本數量多，推(tui)薦使(shi)用(yong)(yong)排(pai)槍加(jia)樣(yang)。
4．請每(mei)次(ci)測定的同時做(zuo)標(biao)準曲(qu)線，最好做(zuo)復(fu)孔。如標(biao)本(ben)中待測物質含量過高（樣本(ben)OD值大于標(biao)準品孔第一孔的OD值），請先(xian)用樣品稀(xi)(xi)釋(shi)液稀(xi)(xi)釋(shi)一定倍(bei)數（n倍(bei)）后(hou)再(zai)測定，計算時請最后(hou)乘以(yi)總稀(xi)(xi)釋(shi)倍(bei)數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底(di)物請(qing)避光保存。
7．嚴格(ge)按照說明書(shu)的操作進行，試驗結果(guo)判定(ding)必須以酶標儀讀(du)數為(wei)準.
8．所(suo)有樣(yang)品，洗滌液和各種廢(fei)棄物(wu)都應按傳染物(wu)處理。
9．本(ben)試劑(ji)不同批號組(zu)分不得混(hun)用。
11.如與英(ying)文(wen)說(shuo)明(ming)書有異，以英(ying)文(wen)說(shuo)明(ming)書為準。
計算：
以標(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃度為(wei)橫坐(zuo)標(biao)，OD值為(wei)縱(zong)坐(zuo)標(biao)，在(zai)坐(zuo)標(biao)紙上(shang)繪(hui)出標(biao)準(zhun)曲(qu)線，根據樣品(pin)的(de)OD
值由標(biao)準(zhun)曲線查出(chu)相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標(biao)準(zhun)物的濃度與(yu)OD值計算(suan)出(chu)標(biao)
準曲線(xian)的直線(xian)回歸方(fang)程式(shi)，將樣品(pin)的OD值代入方(fang)程式(shi)，計算出(chu)樣品(pin)濃(nong)度，再乘(cheng)以稀(xi)釋
倍數(shu)，即為樣品(pin)的(de)實際濃度。
試劑盒性(xing)能(neng)：
1.樣品線(xian)性回歸與預期濃度相(xiang)關系數R值為0.990以上。
2.批(pi)內與批(pi)間(jian)應分(fen)別小(xiao)于9%和11%
保存(cun)條件及有效期：
1.試劑盒(he)保存：；2-8℃。
2．有效(xiao)期：6個(ge)月
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