大鼠可溶性凋亡相關因子(SFAS/Apo-1)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
大鼠可(ke)溶性(xing)凋亡相關因(yin)子(SFAS/Apo-1)試劑盒含(han)量是(shi)固相夾心法(fa)酶(mei)(mei)聯免疫吸附實驗（ELISA）.已(yi)知待測物(wu)質(zhi)(zhi)濃(nong)(nong)度(du)的(de)(de)(de)標準品(pin)、未(wei)知濃(nong)(nong)度(du)的(de)(de)(de)樣品(pin)加(jia)入微孔(kong)酶(mei)(mei)標板內(nei)進行檢測。先將(jiang)待測物(wu)質(zhi)(zhi)和(he)生(sheng)物(wu)素標記的(de)(de)(de)抗體同(tong)時溫育。洗(xi)滌(di)后(hou)，加(jia)入親(qin)和(he)素標記過(guo)的(de)(de)(de)HRP。再經過(guo)溫育和(he)洗(xi)滌(di)，去(qu)除未(wei)結合的(de)(de)(de)酶(mei)(mei)結合物(wu)，然后(hou)加(jia)入底(di)物(wu)A、B，和(he)酶(mei)(mei)結合物(wu)同(tong)時作用。產生(sheng)顏色。顏色的(de)(de)(de)深(shen)淺和(he)樣品(pin)中待測物(wu)質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)濃(nong)(nong)度(du)呈比例(li)關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標(biao)(biao)準品(pin)用(yong)標(biao)(biao)準品(pin)稀釋液(ye)依次(ci)做(zuo)倍比稀釋
標本要求：
1．標本(ben)采(cai)集后盡(jin)早(zao)進行(xing)提取，提取按相關(guan)文獻(xian)進行(xing)，提取后應(ying)(ying)盡(jin)快進行(xing)實驗。若不能馬上進行(xing)試驗，可將標本(ben)放于-20℃保存，但應(ying)(ying)避免反(fan)復凍(dong)融
2．不能檢測含NaN3的樣品(pin)，因NaN3抑(yi)制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.加(jia)(jia)樣(yang)：標準(zhun)品設定(ding)5個濃(nong)度點10個孔，每(mei)個濃(nong)度設定(ding)平行孔，加(jia)(jia)入(ru)(ru)50微升不同濃(nong)度的標準(zhun)品，空白孔設定(ding)1個孔加(jia)(jia)入(ru)(ru)50微升蒸餾水（空白對照孔不加(jia)(jia)樣(yang)品及酶(mei)標試(shi)劑，其余各步操作相同）、待測樣(yang)品孔，在酶(mei)標包被板(ban)(ban)上待測樣(yang)品孔中先加(jia)(jia)樣(yang)品稀(xi)釋液40μl，然(ran)后再(zai)加(jia)(jia)待測樣(yang)品10μl（樣(yang)品最終(zhong)稀(xi)釋度為5倍）。加(jia)(jia)樣(yang)將樣(yang)品加(jia)(jia)于酶(mei)標板(ban)(ban)孔底部，盡量不觸及孔壁，輕(qing)輕(qing)晃動混(hun)勻。
2.溫育(yu)：用封板膜封板后置37℃溫育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。
3.配液：將30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃縮洗滌液用(yong)蒸餾水30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀(xi)釋后(hou)備用(yong)。
4.洗滌：小心(xin)揭掉封(feng)板膜，棄去(qu)液(ye)體，甩(shuai)干，每孔加滿洗滌液(ye)，靜置30秒后棄去(qu)，如此重復5次，拍(pai)干。
5.加酶：每孔加入酶標試劑(ji)50μl，空白孔除外。
6.溫(wen)育(yu)：操作同(tong)2。
7.洗滌：操作同4。
8.顯(xian)色(se)：每孔先加入顯(xian)色(se)劑A50μl，再加入顯(xian)色(se)劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光(guang)顯(xian)色(se)15分鐘.
9.終止(zhi)：每(mei)孔加終止(zhi)液(ye)50μl，終止(zhi)反(fan)應（此時藍(lan)色立(li)轉黃色）。
10.測(ce)定：以空白空調零，450nm波長依序測(ce)量各孔的吸光(guang)度（OD值）。測(ce)定應在加終止液(ye)后15分鐘以內(nei)進行(xing)。
注意事項：
1．試劑(ji)盒(he)從冷藏(zang)環境中取(qu)出應在室溫(wen)平(ping)衡15-30分鐘后(hou)方(fang)可(ke)使用，酶(mei)標包被(bei)板(ban)開封后(hou)如(ru)未用完，板(ban)條(tiao)應裝入(ru)密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有(you)結晶析出(chu)，稀釋時可在水浴中(zhong)加溫(wen)助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步(bu)加(jia)樣(yang)均應使用加(jia)樣(yang)器，并經(jing)常(chang)校對其準(zhun)確性(xing)，以避(bi)免試驗誤差。一次加(jia)樣(yang)時間最(zui)好(hao)控(kong)制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加(jia)樣(yang)。
4．請(qing)每次測定(ding)(ding)的(de)同時做標準曲線，最好做復孔。如標本(ben)中(zhong)待測物質含量(liang)過高（樣本(ben)OD值大于(yu)標準品孔第一孔的(de)OD值），請(qing)先用(yong)樣品稀釋液稀釋一定(ding)(ding)倍(bei)(bei)數(shu)（n倍(bei)(bei)）后再測定(ding)(ding)，計算時請(qing)最后乘以(yi)總稀釋倍(bei)(bei)數(shu)（×n×5）。
5．封板膜只限(xian)一次性(xing)使用，以避免交叉污(wu)染。
6．底物請避光保存(cun)。
7．嚴格按照說明書的操作進(jin)行(xing)，試驗(yan)結果判定必(bi)須以酶標(biao)儀讀數為(wei)準(zhun).
8．所有樣品，洗滌液和(he)各(ge)種廢(fei)棄物(wu)都應按傳染物(wu)處理(li)。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
11.如與(yu)英文(wen)說明書有異，以(yi)英文(wen)說明書為準。
計算：
以標(biao)準物(wu)的(de)濃度為橫坐(zuo)標(biao)，OD值為縱坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙上繪出標(biao)準曲線，根(gen)據(ju)樣品(pin)的(de)OD
值由標(biao)(biao)準(zhun)曲線查出相應(ying)的濃(nong)(nong)度；再乘(cheng)以稀釋倍數(shu)；或用標(biao)(biao)準(zhun)物的濃(nong)(nong)度與OD值計算出標(biao)(biao)
準曲線(xian)的(de)直線(xian)回歸方(fang)程式(shi)，將樣品的(de)OD值(zhi)代入方(fang)程式(shi)，計算(suan)出樣品濃度，再(zai)乘以稀(xi)釋(shi)
倍(bei)數(shu)，即(ji)為樣品的實際濃度。
試劑盒性能：
1.樣品線(xian)性回歸(gui)與預期濃度相關(guan)系數R值(zhi)為0.990以上。
2.批(pi)內與(yu)批(pi)間應分(fen)別小于9%和11%
保(bao)存(cun)條件及有效(xiao)期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期(qi)：6個月
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