人足細胞標記蛋白/足盂蛋白(PCX)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
人足(zu)(zu)細胞(bao)標(biao)(biao)(biao)記蛋(dan)白/足(zu)(zu)盂蛋(dan)白(PCX)試劑(ji)盒含(han)量是固(gu)相夾心(xin)法酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)吸附實驗（ELISA）.已(yi)知待測物(wu)質濃(nong)度的(de)標(biao)(biao)(biao)準品(pin)、未知濃(nong)度的(de)樣(yang)品(pin)加入微(wei)孔酶(mei)標(biao)(biao)(biao)板內進行(xing)檢測。先將待測物(wu)質和(he)生物(wu)素(su)標(biao)(biao)(biao)記的(de)抗(kang)體(ti)同時(shi)溫育。洗滌后，加入親和(he)素(su)標(biao)(biao)(biao)記過(guo)的(de)HRP。再經過(guo)溫育和(he)洗滌，去除未結(jie)合(he)的(de)酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)，然后加入底物(wu)A、B，和(he)酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)同時(shi)作用。產生顏(yan)色。顏(yan)色的(de)深淺和(he)樣(yang)品(pin)中待測物(wu)質的(de)濃(nong)度呈比例關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標準品(pin)用標準品(pin)稀(xi)釋液依(yi)次(ci)做倍比(bi)稀(xi)釋
標本要求：
1．標本采集(ji)后盡早進行提取，提取按相(xiang)關文獻進行，提取后應(ying)盡快進行實驗(yan)。若不能馬上進行試驗(yan)，可將標本放(fang)于-20℃保存(cun)，但應(ying)避免反復凍融
2．不(bu)能(neng)檢(jian)測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣(la)根過(guo)氧化(hua)物酶的（HRP）活(huo)性。
操作步驟:
1.加(jia)樣(yang)：標準品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)設定(ding)5個濃度點10個孔(kong)(kong)，每個濃度設定(ding)平(ping)行(xing)孔(kong)(kong)，加(jia)入50微升不(bu)同濃度的(de)標準品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)，空白孔(kong)(kong)設定(ding)1個孔(kong)(kong)加(jia)入50微升蒸餾水(shui)（空白對照孔(kong)(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)及酶(mei)標試(shi)劑，其余各步操作相(xiang)同）、待測樣(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)，在酶(mei)標包被板上待測樣(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)中先加(jia)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)釋液40μl，然(ran)后再(zai)加(jia)待測樣(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)10μl（樣(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)最終(zhong)稀(xi)釋度為(wei)5倍）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)加(jia)于酶(mei)標板孔(kong)(kong)底部(bu)，盡量(liang)不(bu)觸及孔(kong)(kong)壁(bi)，輕輕晃(huang)動混勻(yun)。
2.溫育(yu)(yu)：用(yong)封板(ban)膜(mo)封板(ban)后置37℃溫育(yu)(yu)30分(fen)鐘。
3.配液(ye)：將30（48T的(de)(de)20倍(bei)）倍(bei)濃縮洗(xi)滌液(ye)用蒸餾水30（48T的(de)(de)20倍(bei)）倍(bei)稀(xi)釋(shi)后備用。
4.洗(xi)滌：小心揭掉封板膜，棄去液(ye)體，甩干，每孔加滿洗(xi)滌液(ye)，靜置30秒后棄去，如此重復5次(ci)，拍(pai)干。
5.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空(kong)白孔除外(wai)。
6.溫(wen)育(yu)：操作同2。
7.洗滌(di)：操作同4。
8.顯(xian)色(se)：每孔(kong)先加入顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再加入顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻，37℃避(bi)光顯(xian)色(se)15分鐘(zhong).
9.終(zhong)止(zhi)：每孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反應（此時(shi)藍色(se)立轉黃色(se)）。
10.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量(liang)各孔(kong)的吸光度(du)（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nei)進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環境中取(qu)出應(ying)在室溫平衡(heng)15-30分鐘(zhong)后方(fang)可使用(yong)，酶標包被板開(kai)封后如(ru)未用(yong)完，板條應(ying)裝入密封袋中保存。
2．濃洗(xi)滌液(ye)可能會有(you)結(jie)晶析出，稀釋(shi)時(shi)可在水浴中加溫助(zhu)溶，洗(xi)滌時(shi)不影響結(jie)果(guo)。
3．各步加樣(yang)(yang)均應使用加樣(yang)(yang)器(qi)，并經常(chang)校對其(qi)準確(que)性，以(yi)避免(mian)試驗誤差。一次加樣(yang)(yang)時間(jian)最好(hao)控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍(qiang)加樣(yang)(yang)。
4．請(qing)每(mei)次測定(ding)的同時做標(biao)準曲(qu)線，最好(hao)做復(fu)孔。如標(biao)本中待測物質(zhi)含(han)量過(guo)高（樣本OD值大(da)于標(biao)準品(pin)孔第一孔的OD值），請(qing)先用(yong)樣品(pin)稀(xi)釋液稀(xi)釋一定(ding)倍數（n倍）后再測定(ding)，計算時請(qing)最后乘以(yi)總稀(xi)釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性(xing)使(shi)用(yong)，以避免交(jiao)叉(cha)污染。
6．底(di)物請(qing)避光保(bao)存。
7．嚴格(ge)按照(zhao)說明書的(de)操作進行(xing)，試驗(yan)結(jie)果判定必須(xu)以酶標儀讀數為準.
8．所有(you)樣(yang)品，洗滌(di)液和各種廢棄物都應(ying)按傳染物處(chu)理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
11.如與(yu)英(ying)文說明書有異，以(yi)英(ying)文說明書為(wei)準(zhun)。
計算：
以標準物的(de)濃度為橫坐(zuo)標，OD值為縱坐(zuo)標，在坐(zuo)標紙上(shang)繪出標準曲(qu)線，根據樣(yang)品的(de)OD
值(zhi)由標準曲線查出(chu)相應的濃度；再乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍數(shu)；或(huo)用標準物(wu)的濃度與(yu)OD值(zhi)計算出(chu)標
準曲線的直線回歸方程式(shi)，將樣(yang)品(pin)的OD值代入方程式(shi)，計算出樣(yang)品(pin)濃度，再乘以稀釋
倍(bei)數，即為樣(yang)品的(de)實際濃度(du)。
試劑盒(he)性能：
1.樣品(pin)線性回(hui)歸與(yu)預期(qi)濃度(du)相關系數R值為(wei)0.990以上(shang)。
2.批(pi)(pi)內與批(pi)(pi)間應分別小于9%和11%
保存條(tiao)件及有效期(qi)：
1.試劑盒(he)保(bao)存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
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