兔子活化部分凝血活酶時間(APTT)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
兔子活(huo)(huo)化部分凝血活(huo)(huo)酶時間(APTT)試劑(ji)盒含量是固相夾心(xin)法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物(wu)質(zhi)濃度(du)的標(biao)準品、未(wei)知濃度(du)的樣品加(jia)(jia)入微孔酶標(biao)板內進行(xing)檢測。先將待測物(wu)質(zhi)和(he)生物(wu)素標(biao)記(ji)的抗體(ti)同時溫(wen)育。洗(xi)滌后，加(jia)(jia)入親和(he)素標(biao)記(ji)過的HRP。再(zai)經過溫(wen)育和(he)洗(xi)滌，去除未(wei)結(jie)合的酶結(jie)合物(wu)，然后加(jia)(jia)入底(di)物(wu)A、B，和(he)酶結(jie)合物(wu)同時作用。產生顏(yan)色。顏(yan)色的深淺和(he)樣品中待測物(wu)質(zhi)的濃度(du)呈比例關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標(biao)準品用標(biao)準品稀(xi)釋(shi)液依次(ci)做倍比稀(xi)釋(shi)
標本要求：
1．標本采集后盡(jin)早進行(xing)提(ti)(ti)取(qu)，提(ti)(ti)取(qu)按相關文獻(xian)進行(xing)，提(ti)(ti)取(qu)后應(ying)盡(jin)快(kuai)進行(xing)實(shi)驗。若不能(neng)馬上進行(xing)試驗，可將(jiang)標本放于-20℃保存(cun)，但應(ying)避(bi)免反復凍融
2．不能檢測含(han)NaN3的樣(yang)品，因NaN3抑制辣(la)根過氧化物(wu)酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.加(jia)樣(yang)(yang)：標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)設定5個濃度(du)點10個孔(kong)(kong)，每(mei)個濃度(du)設定平(ping)行孔(kong)(kong)，加(jia)入50微升(sheng)不同濃度(du)的標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)，空白(bai)孔(kong)(kong)設定1個孔(kong)(kong)加(jia)入50微升(sheng)蒸餾(liu)水（空白(bai)對照孔(kong)(kong)不加(jia)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)及(ji)酶(mei)標(biao)試(shi)劑，其余各步(bu)操作(zuo)相(xiang)同）、待測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)，在酶(mei)標(biao)包被板上待測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)中先(xian)加(jia)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)稀釋液(ye)40μl，然(ran)后再加(jia)待測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)品(pin)(pin)最終(zhong)稀釋度(du)為(wei)5倍）。加(jia)樣(yang)(yang)將(jiang)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)加(jia)于酶(mei)標(biao)板孔(kong)(kong)底部，盡量(liang)不觸及(ji)孔(kong)(kong)壁，輕輕晃動混勻。
2.溫育：用封板膜(mo)封板后置(zhi)37℃溫育30分鐘。
3.配液：將(jiang)30（48T的20倍(bei)(bei)）倍(bei)(bei)濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍(bei)(bei)）倍(bei)(bei)稀釋后備用。
4.洗滌：小(xiao)心揭掉封板膜(mo)，棄去(qu)液(ye)體，甩干(gan)，每孔加滿洗滌液(ye)，靜置30秒后棄去(qu)，如此重復5次，拍干(gan)。
5.加酶(mei)：每孔(kong)加入(ru)酶(mei)標(biao)試劑50μl，空白孔(kong)除外(wai)。
6.溫育：操作同2。
7.洗滌：操作同4。
8.顯(xian)色：每孔(kong)先加入顯(xian)色劑A50μl，再加入顯(xian)色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯(xian)色15分(fen)鐘.
9.終止：每孔加(jia)終止液(ye)50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuan)黃色）。
10.測定：以空(kong)白空(kong)調零，450nm波長依序測量各孔的吸光(guang)度（OD值(zhi)）。測定應在加終止液后15分鐘(zhong)以內進行。
注意事項：
1．試劑盒(he)從冷藏環境(jing)中取出應在(zai)室溫平衡15-30分(fen)鐘后方(fang)可使用，酶(mei)標包(bao)被板(ban)開封(feng)后如未用完，板(ban)條應裝入密封(feng)袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在(zai)水浴中(zhong)加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用(yong)加樣器，并經(jing)常(chang)校對其準確性，以避免試(shi)驗誤差(cha)。一次加樣時間最好(hao)控制在5分(fen)鐘內(nei)，如(ru)標(biao)本數量多，推薦使用(yong)排槍加樣。
4．請(qing)(qing)每次測(ce)定的同(tong)時做標準(zhun)曲線，最好(hao)做復孔。如(ru)標本中待測(ce)物質含量過高（樣(yang)本OD值大于標準(zhun)品孔第一孔的OD值），請(qing)(qing)先(xian)用樣(yang)品稀(xi)釋液稀(xi)釋一定倍數（n倍）后再測(ce)定，計算時請(qing)(qing)最后乘以總稀(xi)釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一(yi)次性使用，以避免交叉(cha)污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格(ge)按照說明書的操(cao)作進行，試驗結果判定必須以酶標(biao)儀(yi)讀(du)數為準.
8．所有樣品，洗滌(di)液和各種(zhong)廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑(ji)不同批號組分不得混(hun)用。
11.如與(yu)英文說明書有異，以(yi)英文說明書為準(zhun)。
計算：
以標(biao)準物的(de)濃度(du)為(wei)橫坐標(biao)，OD值為(wei)縱坐標(biao)，在坐標(biao)紙上繪出標(biao)準曲線，根據樣品的(de)OD
值由標(biao)準(zhun)曲線查出相應的(de)濃度；再(zai)乘以稀釋倍(bei)數；或(huo)用標(biao)準(zhun)物的(de)濃度與OD值計算(suan)出標(biao)
準(zhun)曲線(xian)的直線(xian)回歸方程式(shi)，將(jiang)樣(yang)(yang)品(pin)的OD值(zhi)代(dai)入方程式(shi)，計算出(chu)樣(yang)(yang)品(pin)濃(nong)度，再乘以稀(xi)釋
倍數，即為樣品的實際(ji)濃度。
試劑(ji)盒性(xing)能(neng)：
1.樣品線(xian)性回歸與預期濃度(du)相關(guan)系數(shu)R值為0.990以(yi)上。
2.批(pi)內與(yu)批(pi)間應分別小于(yu)9%和(he)11%
保存條件(jian)及(ji)有效期(qi)：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
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