斑馬魚β干擾素(IFN-β)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
斑馬魚β干(gan)擾素(su)(IFN-β)試劑(ji)盒含量是固(gu)相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)(wu)(wu)質濃度的標準(zhun)品、未知濃度的樣(yang)品加(jia)入微孔酶標板內(nei)進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)(ce)。先將待(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)(wu)(wu)質和生物(wu)(wu)(wu)(wu)素(su)標記的抗體同(tong)時溫(wen)育(yu)。洗滌(di)后(hou)(hou)，加(jia)入親和素(su)標記過(guo)的HRP。再經過(guo)溫(wen)育(yu)和洗滌(di)，去(qu)除(chu)未結(jie)合的酶結(jie)合物(wu)(wu)(wu)(wu)，然后(hou)(hou)加(jia)入底物(wu)(wu)(wu)(wu)A、B，和酶結(jie)合物(wu)(wu)(wu)(wu)同(tong)時作用。產生顏色。顏色的深(shen)淺和樣(yang)品中待(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)(wu)(wu)質的濃度呈比(bi)例關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標(biao)(biao)準品用標(biao)(biao)準品稀(xi)釋(shi)液(ye)依次(ci)做倍(bei)比稀(xi)釋(shi)
標本要求：
1．標本采(cai)集后(hou)盡(jin)早(zao)進(jin)行提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相關文(wen)獻進(jin)行，提(ti)取(qu)后(hou)應(ying)盡(jin)快進(jin)行實(shi)驗。若不能(neng)馬上進(jin)行試(shi)驗，可將標本放(fang)于-20℃保存，但應(ying)避(bi)免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑制(zhi)辣根過氧化物酶的(de)（HRP）活性。
操作步驟:
1.加(jia)(jia)樣(yang)(yang)：標(biao)準(zhun)品設定(ding)5個濃(nong)度(du)點10個孔(kong)，每(mei)個濃(nong)度(du)設定(ding)平(ping)行孔(kong)，加(jia)(jia)入(ru)(ru)50微升(sheng)(sheng)不同(tong)濃(nong)度(du)的標(biao)準(zhun)品，空白孔(kong)設定(ding)1個孔(kong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)50微升(sheng)(sheng)蒸餾(liu)水（空白對(dui)照孔(kong)不加(jia)(jia)樣(yang)(yang)品及(ji)酶標(biao)試劑，其(qi)余(yu)各步操作相同(tong)）、待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品孔(kong)，在酶標(biao)包被板(ban)上待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品孔(kong)中先加(jia)(jia)樣(yang)(yang)品稀(xi)釋液40μl，然后(hou)再(zai)加(jia)(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品10μl（樣(yang)(yang)品最終稀(xi)釋度(du)為5倍(bei)）。加(jia)(jia)樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品加(jia)(jia)于酶標(biao)板(ban)孔(kong)底部，盡量不觸及(ji)孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混(hun)勻。
2.溫(wen)育(yu)：用封板膜封板后置(zhi)37℃溫(wen)育(yu)30分鐘。
3.配液：將30（48T的(de)20倍(bei)(bei)）倍(bei)(bei)濃縮洗滌液用(yong)蒸(zheng)餾水30（48T的(de)20倍(bei)(bei)）倍(bei)(bei)稀釋后備用(yong)。
4.洗(xi)滌：小心揭掉封板(ban)膜，棄(qi)去液體，甩干(gan)，每孔加滿(man)洗(xi)滌液，靜置30秒后棄(qi)去，如此重復5次，拍干(gan)。
5.加酶(mei)：每孔加入(ru)酶(mei)標試劑50μl，空白(bai)孔除外。
6.溫育：操作同(tong)2。
7.洗滌：操作同4。
8.顯(xian)色：每孔先加入顯(xian)色劑A50μl，再加入顯(xian)色劑B50μl，輕輕震蕩(dang)混(hun)勻，37℃避光顯(xian)色15分鐘.
9.終(zhong)止：每孔加終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應(ying)（此(ci)時(shi)藍色(se)立轉黃色(se)）。
10.測定(ding)：以空(kong)白空(kong)調(diao)零(ling)，450nm波長依序測量各孔的吸(xi)光度（OD值）。測定(ding)應在加終止液后15分鐘以內進行。
注意事項：
1．試(shi)劑盒(he)從冷藏環(huan)境(jing)中(zhong)取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包(bao)被板開(kai)封后如未用完，板條應裝入密封袋中(zhong)保存。
2．濃(nong)洗滌(di)(di)液(ye)可(ke)能會有(you)結晶析出，稀釋(shi)時可(ke)在(zai)水浴中(zhong)加溫助(zhu)溶，洗滌(di)(di)時不影(ying)響結果。
3．各步加樣均應使(shi)用(yong)加樣器，并經常校(xiao)對其準確性，以避(bi)免試驗誤差。一次(ci)加樣時(shi)間(jian)最好(hao)控制(zhi)在5分(fen)鐘內，如標(biao)本數量多(duo)，推(tui)薦使(shi)用(yong)排槍加樣。
4．請每次測定(ding)的(de)同時做(zuo)(zuo)標準曲線，最好做(zuo)(zuo)復(fu)孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大(da)于標準品孔第一孔的(de)OD值），請先(xian)用(yong)樣品稀(xi)釋液稀(xi)釋一定(ding)倍(bei)數(shu)（n倍(bei)）后(hou)再測定(ding)，計算時請最后(hou)乘以(yi)總稀(xi)釋倍(bei)數(shu)（×n×5）。
5．封(feng)板(ban)膜只限一次性使用(yong)，以(yi)避免交叉污(wu)染。
6．底物請避(bi)光保存(cun)。
7．嚴格按照說明(ming)書的操作進行(xing)，試驗(yan)結果判定必須(xu)以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品(pin)，洗滌液(ye)和各種廢棄(qi)物(wu)都應按(an)傳(chuan)染物(wu)處理。
9．本試(shi)劑不(bu)同批(pi)號組分不(bu)得混用。
11.如與英文(wen)說(shuo)明(ming)書(shu)有異(yi)，以英文(wen)說(shuo)明(ming)書(shu)為準。
計算：
以標(biao)準(zhun)物的濃度為(wei)橫坐(zuo)標(biao)，OD值為(wei)縱坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙上繪出標(biao)準(zhun)曲線，根據樣品(pin)的OD
值(zhi)由標準(zhun)曲線查出(chu)相應的濃度；再(zai)乘以稀釋倍數；或用(yong)標準(zhun)物的濃度與(yu)OD值(zhi)計算出(chu)標
準(zhun)曲線的(de)直線回歸方(fang)程式(shi)，將樣品的(de)OD值代(dai)入方(fang)程式(shi)，計算(suan)出樣品濃度(du)，再乘以稀釋
倍數，即為樣品的實際濃度(du)。
試劑盒性能：
1.樣品線性回(hui)歸與預期濃度相關系數(shu)R值為0.990以上(shang)。
2.批內與批間(jian)應分別小(xiao)于9%和11%
保存條件及有效期：
1.試(shi)劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月(yue)
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