斑馬魚白介素10（IL-10）酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
斑馬魚白介素(su)10（IL-10）試劑盒(he)含量是固(gu)相(xiang)夾心法(fa)酶(mei)(mei)聯免疫吸(xi)附(fu)實驗（ELISA）.已知待測物(wu)(wu)質濃度(du)(du)的標(biao)準(zhun)品(pin)、未知濃度(du)(du)的樣(yang)品(pin)加入(ru)(ru)微(wei)孔酶(mei)(mei)標(biao)板內進行(xing)檢測。先將待測物(wu)(wu)質和(he)(he)生物(wu)(wu)素(su)標(biao)記(ji)的抗體同時溫育(yu)。洗滌后，加入(ru)(ru)親和(he)(he)素(su)標(biao)記(ji)過(guo)的HRP。再經過(guo)溫育(yu)和(he)(he)洗滌，去除未結(jie)合的酶(mei)(mei)結(jie)合物(wu)(wu)，然后加入(ru)(ru)底(di)物(wu)(wu)A、B，和(he)(he)酶(mei)(mei)結(jie)合物(wu)(wu)同時作用。產生顏色。顏色的深淺(qian)和(he)(he)樣(yang)品(pin)中待測物(wu)(wu)質的濃度(du)(du)呈比例關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標準品用標準品稀釋液(ye)依次(ci)做(zuo)倍比稀釋
標本要求：
1．標本采集后盡(jin)早進行提取(qu)(qu)，提取(qu)(qu)按(an)相關(guan)文(wen)獻進行，提取(qu)(qu)后應(ying)盡(jin)快進行實(shi)驗。若不能馬上進行試驗，可將(jiang)標本放于-20℃保存，但應(ying)避免反復凍融
2．不(bu)能檢(jian)測含NaN3的樣品，因(yin)NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.加樣(yang)(yang)：標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)設定(ding)(ding)5個濃(nong)(nong)度點10個孔(kong)(kong)，每(mei)個濃(nong)(nong)度設定(ding)(ding)平行孔(kong)(kong)，加入50微升不(bu)同(tong)濃(nong)(nong)度的標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)，空(kong)(kong)白孔(kong)(kong)設定(ding)(ding)1個孔(kong)(kong)加入50微升蒸餾水(shui)（空(kong)(kong)白對照孔(kong)(kong)不(bu)加樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)及酶標(biao)試劑，其(qi)余各步操作相同(tong)）、待測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)，在酶標(biao)包被板上待測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)中先(xian)加樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)稀釋液40μl，然后再(zai)加待測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)最終稀釋度為5倍）。加樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)加于酶標(biao)板孔(kong)(kong)底部，盡量不(bu)觸及孔(kong)(kong)壁，輕輕晃動混勻(yun)。
2.溫育：用封板(ban)膜封板(ban)后置37℃溫育30分鐘。
3.配(pei)液：將30（48T的(de)20倍）倍濃縮洗(xi)滌(di)液用(yong)蒸餾水(shui)30（48T的(de)20倍）倍稀釋后(hou)備用(yong)。
4.洗(xi)滌：小心揭掉封板(ban)膜(mo)，棄(qi)去液(ye)體，甩(shuai)干，每孔加(jia)滿洗(xi)滌液(ye)，靜(jing)置30秒后棄(qi)去，如(ru)此重復5次，拍干。
5.加酶：每孔加入(ru)酶標試(shi)劑50μl，空(kong)白孔除外(wai)。
6.溫育：操作同2。
7.洗滌：操作同4。
8.顯(xian)色(se)(se)：每孔先(xian)加入(ru)顯(xian)色(se)(se)劑A50μl，再加入(ru)顯(xian)色(se)(se)劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃避光顯(xian)色(se)(se)15分鐘.
9.終(zhong)止(zhi)：每孔加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應（此時藍色(se)立轉黃色(se)）。
10.測定(ding)：以(yi)空白空調零，450nm波長依序(xu)測量(liang)各孔的吸(xi)光(guang)度（OD值）。測定(ding)應(ying)在加終止液后15分鐘以(yi)內進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏(zang)環境中取(qu)出應在室(shi)溫(wen)平衡15-30分鐘后(hou)方可使用(yong)，酶標包被(bei)板(ban)開(kai)封后(hou)如未用(yong)完，板(ban)條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能(neng)會有結(jie)晶(jing)析(xi)出，稀釋時可在水(shui)浴中加溫助(zhu)溶，洗滌時不影(ying)響結(jie)果。
3．各步加(jia)(jia)樣均應使用加(jia)(jia)樣器，并(bing)經常(chang)校對其(qi)準確性，以(yi)避(bi)免試驗誤差(cha)。一次(ci)加(jia)(jia)樣時間最(zui)好控制(zhi)在5分鐘(zhong)內，如標本(ben)數量(liang)多，推薦使用排槍加(jia)(jia)樣。
4．請每次測(ce)(ce)定的同時做標準曲線(xian)，最好做復孔。如標本(ben)中待測(ce)(ce)物(wu)質(zhi)含量過高（樣本(ben)OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀(xi)(xi)釋液稀(xi)(xi)釋一定倍數(shu)（n倍）后再測(ce)(ce)定，計算(suan)時請最后乘以總(zong)稀(xi)(xi)釋倍數(shu)（×n×5）。
5．封板膜(mo)只(zhi)限(xian)一次性使(shi)用(yong)，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存(cun)。
7．嚴格按(an)照說明書的操作進行，試驗結果判定必須(xu)以(yi)酶標儀讀數為準.
8．所有(you)樣品，洗(xi)滌液和各種廢棄物都應按(an)傳(chuan)染物處(chu)理。
9．本試(shi)劑(ji)不(bu)同批號(hao)組分不(bu)得(de)混用。
11.如與英文(wen)說明書(shu)有異，以英文(wen)說明書(shu)為準。
計算：
以標(biao)準物(wu)的濃度為橫(heng)坐(zuo)標(biao)，OD值為縱坐(zuo)標(biao)，在(zai)坐(zuo)標(biao)紙上繪出標(biao)準曲線，根據(ju)樣品(pin)的OD
值由標(biao)準曲線查出相應的(de)濃(nong)度；再乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍數；或用標(biao)準物的(de)濃(nong)度與OD值計算(suan)出標(biao)
準曲線的直線回歸(gui)方程(cheng)式，將樣(yang)品(pin)的OD值代入方程(cheng)式，計算出樣(yang)品(pin)濃(nong)度，再乘以(yi)稀釋
倍(bei)數(shu)，即為(wei)樣(yang)品(pin)的實際濃度。
試劑(ji)盒性能：
1.樣品線性回歸(gui)與預期濃度相關系(xi)數(shu)R值為0.990以上。
2.批(pi)(pi)內與批(pi)(pi)間應分別(bie)小于9%和11%
保(bao)存條件及有效期：
1.試劑(ji)盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
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