人骨形態發生蛋白3(BMP-3)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
人(ren)骨形態(tai)發生(sheng)蛋白3(BMP-3)試劑盒含(han)量是固相(xiang)夾心法(fa)酶(mei)聯(lian)免疫(yi)吸附實(shi)驗（ELISA）.已(yi)知(zhi)待測(ce)物(wu)質(zhi)濃(nong)度(du)的(de)(de)標準品(pin)、未知(zhi)濃(nong)度(du)的(de)(de)樣品(pin)加入微孔酶(mei)標板內(nei)進行檢(jian)測(ce)。先將待測(ce)物(wu)質(zhi)和(he)生(sheng)物(wu)素(su)標記(ji)的(de)(de)抗體同(tong)時(shi)溫育。洗(xi)滌(di)后(hou)，加入親(qin)和(he)素(su)標記(ji)過(guo)的(de)(de)HRP。再(zai)經過(guo)溫育和(he)洗(xi)滌(di)，去除(chu)未結(jie)合(he)的(de)(de)酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)，然后(hou)加入底物(wu)A、B，和(he)酶(mei)結(jie)合(he)物(wu)同(tong)時(shi)作(zuo)用。產生(sheng)顏色。顏色的(de)(de)深淺和(he)樣品(pin)中(zhong)待測(ce)物(wu)質(zhi)的(de)(de)濃(nong)度(du)呈比例關系(xi)‘
’
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標(biao)(biao)準品用標(biao)(biao)準品稀釋液依(yi)次做倍比稀釋
標本要求：
1．標本采集后(hou)盡早進行(xing)提取(qu)(qu)，提取(qu)(qu)按相關文(wen)獻進行(xing)，提取(qu)(qu)后(hou)應(ying)(ying)盡快進行(xing)實驗(yan)。若不能馬上進行(xing)試驗(yan)，可將標本放于(yu)-20℃保存，但應(ying)(ying)避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的(de)(de)樣品，因NaN3抑制辣(la)根(gen)過氧化物酶的(de)(de)（HRP）活性。
操作步驟:
1.加樣(yang)(yang)(yang)(yang)：標(biao)準(zhun)品設(she)定(ding)5個(ge)濃度點10個(ge)孔(kong)，每個(ge)濃度設(she)定(ding)平(ping)行孔(kong)，加入(ru)50微(wei)升不同(tong)濃度的標(biao)準(zhun)品，空(kong)白孔(kong)設(she)定(ding)1個(ge)孔(kong)加入(ru)50微(wei)升蒸(zheng)餾水（空(kong)白對(dui)照孔(kong)不加樣(yang)(yang)(yang)(yang)品及酶標(biao)試劑，其余各(ge)步(bu)操作相同(tong)）、待(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品孔(kong)，在(zai)酶標(biao)包被板上待(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品孔(kong)中先加樣(yang)(yang)(yang)(yang)品稀(xi)釋液(ye)40μl，然(ran)后再加待(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品10μl（樣(yang)(yang)(yang)(yang)品最終(zhong)稀(xi)釋度為5倍）。加樣(yang)(yang)(yang)(yang)將(jiang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品加于酶標(biao)板孔(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃動(dong)混勻。
2.溫(wen)育：用(yong)封(feng)板膜(mo)封(feng)板后置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘。
3.配液：將(jiang)30（48T的20倍(bei)）倍(bei)濃縮洗(xi)滌液用蒸(zheng)餾(liu)水30（48T的20倍(bei)）倍(bei)稀釋(shi)后備用。
4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄(qi)去液(ye)體，甩(shuai)干，每(mei)孔加滿洗滌液(ye)，靜置30秒后棄(qi)去，如此重復(fu)5次，拍干。
5.加酶(mei)：每孔加入酶(mei)標試(shi)劑50μl，空白(bai)孔除(chu)外。
6.溫(wen)育：操(cao)作(zuo)同(tong)2。
7.洗滌：操(cao)作同4。
8.顯(xian)色：每孔(kong)先加入顯(xian)色劑A50μl，再(zai)加入顯(xian)色劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃避光顯(xian)色15分鐘.
9.終(zhong)止(zhi)：每孔加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反應(ying)（此(ci)時(shi)藍色立(li)轉黃色）。
10.測定(ding)：以(yi)空(kong)白空(kong)調零，450nm波長依(yi)序測量各(ge)孔的吸光度（OD值）。測定(ding)應在加終止(zhi)液后15分鐘以(yi)內進行。
注意事項：
1．試劑盒(he)從(cong)冷藏環境中(zhong)取出應(ying)(ying)在(zai)室溫(wen)平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biao)包被板(ban)開(kai)封后如未用完，板(ban)條應(ying)(ying)裝入密封袋中(zhong)保存。
2．濃洗(xi)滌(di)(di)液可(ke)(ke)能會有結晶析(xi)出，稀(xi)釋時(shi)可(ke)(ke)在水浴中(zhong)加溫助溶，洗(xi)滌(di)(di)時(shi)不影(ying)響結果(guo)。
3．各步加(jia)樣(yang)(yang)均應使用加(jia)樣(yang)(yang)器，并經常校對(dui)其準(zhun)確性，以避(bi)免試驗誤差。一次加(jia)樣(yang)(yang)時間最好控制(zhi)在5分(fen)鐘內，如標(biao)本(ben)數量多(duo)，推薦使用排槍加(jia)樣(yang)(yang)。
4．請(qing)每(mei)次測定的(de)同時(shi)做標(biao)準曲(qu)線，最好做復孔。如標(biao)本(ben)中待測物質含量(liang)過高（樣(yang)本(ben)OD值(zhi)大于標(biao)準品孔第(di)一孔的(de)OD值(zhi)），請(qing)先用樣(yang)品稀釋(shi)液稀釋(shi)一定倍數（n倍）后再測定，計算時(shi)請(qing)最后乘以總稀釋(shi)倍數（×n×5）。
5．封板膜只(zhi)限一(yi)次(ci)性使(shi)用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yan)格(ge)按照說(shuo)明(ming)書的操作(zuo)進行，試(shi)驗結果(guo)判定必須以(yi)酶標儀讀數為準.
8．所有樣(yang)品，洗滌液和各種(zhong)廢棄物(wu)(wu)都應按(an)傳染物(wu)(wu)處理。
9．本試劑(ji)不(bu)同批號組分(fen)不(bu)得混用(yong)。
11.如與(yu)英文(wen)說明書有異，以英文(wen)說明書為準。
計算：
以標(biao)準物的濃(nong)度為(wei)橫坐(zuo)(zuo)標(biao)，OD值為(wei)縱坐(zuo)(zuo)標(biao)，在坐(zuo)(zuo)標(biao)紙上(shang)繪出標(biao)準曲線，根據樣品的OD
值由標準(zhun)曲線(xian)查出相應的濃度(du)；再乘以稀釋(shi)倍數；或用標準(zhun)物的濃度(du)與OD值計(ji)算出標
準(zhun)曲(qu)線(xian)的直(zhi)線(xian)回歸方程式，將樣(yang)品的OD值代(dai)入方程式，計算出樣(yang)品濃度，再乘以稀釋
倍(bei)數，即(ji)為樣品的實(shi)際濃度。
試(shi)劑盒性(xing)能：
1.樣(yang)品線性(xing)回歸與預期濃度相關系數R值為0.990以(yi)上。
2.批內(nei)與批間應分別小于(yu)9%和11%
保存條件及有效期：
1.試(shi)劑盒保存：；2-8℃。
2．有(you)效期：6個(ge)月(yue)
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