人分泌型卷曲相關蛋白5(SFRP5)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
人分泌型卷曲相關蛋(dan)白5(SFRP5)試劑盒含量是(shi)固相夾心(xin)法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待(dai)測(ce)(ce)物(wu)質(zhi)濃(nong)度(du)的(de)標(biao)準品(pin)、未知濃(nong)度(du)的(de)樣品(pin)加(jia)入(ru)微孔(kong)酶標(biao)板內(nei)進行(xing)檢測(ce)(ce)。先(xian)將待(dai)測(ce)(ce)物(wu)質(zhi)和(he)生(sheng)物(wu)素(su)標(biao)記的(de)抗體同(tong)時溫育。洗(xi)滌(di)后，加(jia)入(ru)親和(he)素(su)標(biao)記過的(de)HRP。再(zai)經過溫育和(he)洗(xi)滌(di)，去除未結(jie)合的(de)酶結(jie)合物(wu)，然后加(jia)入(ru)底(di)物(wu)A、B，和(he)酶結(jie)合物(wu)同(tong)時作(zuo)用。產生(sheng)顏色(se)。顏色(se)的(de)深淺和(he)樣品(pin)中待(dai)測(ce)(ce)物(wu)質(zhi)的(de)濃(nong)度(du)呈(cheng)比例關系(xi)。
試劑盒組成：
|
試劑盒組成
|
48孔配置
|
96孔配置
|
保存
|
|
說明書
|
1份
|
1份
|
|
|
封板膜
|
2片（48）
|
2片（96）
|
|
|
密封袋
|
1個
|
1個
|
|
|
酶標包被板
|
1×48
|
1×96
|
2-8℃保存
|
|
標準品
|
0.5ml×1瓶
|
0.5ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
標準品稀釋液
|
1.5ml×1瓶
|
1.5ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
酶標試劑
|
3 ml×1瓶
|
6 ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
樣品稀釋液
|
3 ml×1瓶
|
6 ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
顯色劑A液
|
3 ml×1瓶
|
6 ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
顯色劑B液
|
3 ml×1瓶
|
6 ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
終止液
|
3ml×1瓶
|
6ml×1瓶
|
2-8℃保存
|
|
濃縮洗滌液
|
（20ml×20倍）×1瓶
|
（20ml×30倍）×1瓶
|
2-8℃保存
|
注：標準品(pin)(pin)用標準品(pin)(pin)稀釋液(ye)依次做(zuo)倍比(bi)稀釋
標本要求：
1．標本采集后(hou)盡早(zao)進行提(ti)(ti)取，提(ti)(ti)取按相關(guan)文獻進行，提(ti)(ti)取后(hou)應盡快進行實驗。若(ruo)不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存(cun)，但(dan)應避免反復凍融
2．不能(neng)檢(jian)測(ce)含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑制(zhi)辣根(gen)過氧化物酶的(de)（HRP）活(huo)性。
操作步驟:
1.加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)：標準品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)設定5個(ge)濃度點10個(ge)孔，每個(ge)濃度設定平行孔，加(jia)(jia)入50微升不同濃度的標準品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)，空(kong)(kong)白(bai)孔設定1個(ge)孔加(jia)(jia)入50微升蒸餾(liu)水（空(kong)(kong)白(bai)對照孔不加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)及(ji)酶標試劑，其余各步操(cao)作(zuo)相(xiang)同）、待(dai)(dai)測(ce)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)孔，在酶標包被板上(shang)待(dai)(dai)測(ce)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)孔中先加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)稀釋(shi)液40μl，然后(hou)再(zai)加(jia)(jia)待(dai)(dai)測(ce)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)最終稀釋(shi)度為5倍）。加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)加(jia)(jia)于(yu)酶標板孔底部(bu)，盡量不觸(chu)及(ji)孔壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混勻。
2.溫(wen)育：用封板膜封板后置37℃溫(wen)育30分鐘。
3.配液：將30（48T的(de)(de)20倍）倍濃縮洗滌液用(yong)蒸餾(liu)水30（48T的(de)(de)20倍）倍稀釋后備用(yong)。
4.洗(xi)滌：小心(xin)揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗(xi)滌液，靜置30秒后棄去，如此(ci)重復5次，拍干。
5.加酶：每孔加入酶標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空白(bai)孔除外(wai)。
6.溫育(yu)：操作同2。
7.洗(xi)滌：操作同(tong)4。
8.顯(xian)色(se)：每孔先加(jia)入顯(xian)色(se)劑A50μl，再加(jia)入顯(xian)色(se)劑B50μl，輕輕震蕩(dang)混勻，37℃避光顯(xian)色(se)15分(fen)鐘.
9.終(zhong)止：每孔加(jia)終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應（此時藍色(se)立轉黃(huang)色(se)）。
10.測(ce)(ce)定：以空白空調零(ling)，450nm波(bo)長依序(xu)測(ce)(ce)量各孔的吸光度（OD值）。測(ce)(ce)定應在加終止(zhi)液后15分鐘以內進(jin)行。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環境(jing)中取出應在(zai)室溫(wen)平(ping)衡(heng)15-30分鐘后(hou)方可使用(yong)，酶標包被板開封(feng)后(hou)如未用(yong)完，板條應裝入密封(feng)袋中保存(cun)。
2．濃洗滌(di)液可(ke)能會有結(jie)晶析出，稀釋(shi)時可(ke)在(zai)水浴(yu)中加溫助溶，洗滌(di)時不影(ying)響結(jie)果。
3．各步加(jia)(jia)樣均(jun)應使用加(jia)(jia)樣器，并(bing)經(jing)常校(xiao)對(dui)其準確(que)性(xing)，以避免試驗誤差。一次加(jia)(jia)樣時間最(zui)好控制(zhi)在(zai)5分鐘內，如(ru)標(biao)本(ben)數量多，推薦使用排槍加(jia)(jia)樣。
4．請每(mei)次測定(ding)(ding)的同時(shi)做(zuo)(zuo)標(biao)(biao)準(zhun)曲線，最(zui)(zui)好做(zuo)(zuo)復孔。如標(biao)(biao)本(ben)中待測物質含量過高（樣本(ben)OD值(zhi)大于標(biao)(biao)準(zhun)品孔第一孔的OD值(zhi)），請先(xian)用(yong)樣品稀釋(shi)液稀釋(shi)一定(ding)(ding)倍(bei)數(shu)（n倍(bei)）后再測定(ding)(ding)，計算時(shi)請最(zui)(zui)后乘以總稀釋(shi)倍(bei)數(shu)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交(jiao)叉(cha)污染。
6．底物(wu)請(qing)避光保存。
7．嚴格按(an)照說明(ming)書的操(cao)作進行，試驗(yan)結果(guo)判定必(bi)須以酶標儀讀數為準.
8．所有(you)樣(yang)品，洗滌液和各(ge)種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試(shi)劑不(bu)同批號組分不(bu)得混用。
11.如與(yu)英文說明書有(you)異，以英文說明書為準。
計算：
以標(biao)準物的濃(nong)度為橫坐標(biao)，OD值(zhi)為縱(zong)坐標(biao)，在坐標(biao)紙上繪出標(biao)準曲線，根據樣品的OD
值由(you)標(biao)準曲(qu)線查出相應的(de)濃度；再(zai)乘(cheng)以(yi)稀釋倍(bei)數；或(huo)用標(biao)準物的(de)濃度與OD值計算出標(biao)
準曲線的直線回歸方程式，將(jiang)樣(yang)品的OD值(zhi)代入方程式，計算出(chu)樣(yang)品濃(nong)度(du)，再(zai)乘以稀釋
倍數，即為樣品的實際濃(nong)度。
試劑盒性(xing)能：
1.樣品線性回歸(gui)與預(yu)期(qi)濃(nong)度相(xiang)關系數R值為0.990以上。
2.批內與(yu)批間應分別小(xiao)于9%和(he)11%
保(bao)存條件及有效期：
1.試(shi)劑(ji)盒(he)保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
購物車
點擊咨詢
2505646471
400-8830-979 