胸苷激酶1(TK1)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
胸苷激(ji)酶(mei)(mei)1(TK1)試劑(ji)盒含量是固相夾心法(fa)酶(mei)(mei)聯(lian)免疫(yi)吸(xi)附(fu)實驗（ELISA）.已知待(dai)(dai)測物(wu)質(zhi)濃(nong)度(du)的(de)標準品、未知濃(nong)度(du)的(de)樣品加(jia)入(ru)微孔酶(mei)(mei)標板內進行檢(jian)測。先(xian)將待(dai)(dai)測物(wu)質(zhi)和生物(wu)素(su)(su)標記(ji)的(de)抗體同(tong)時溫(wen)育(yu)。洗滌后，加(jia)入(ru)親和素(su)(su)標記(ji)過的(de)HRP。再經(jing)過溫(wen)育(yu)和洗滌，去除未結(jie)合(he)的(de)酶(mei)(mei)結(jie)合(he)物(wu)，然(ran)后加(jia)入(ru)底物(wu)A、B，和酶(mei)(mei)結(jie)合(he)物(wu)同(tong)時作用。產(chan)生顏色(se)(se)。顏色(se)(se)的(de)深淺和樣品中待(dai)(dai)測物(wu)質(zhi)的(de)濃(nong)度(du)呈比例關系(xi)。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注(zhu)：標準(zhun)品用標準(zhun)品稀釋(shi)(shi)液依次做倍(bei)比稀釋(shi)(shi)
標本要求：
1．標(biao)本(ben)采集后(hou)盡早進(jin)(jin)行(xing)提取(qu)，提取(qu)按(an)相(xiang)關(guan)文獻進(jin)(jin)行(xing)，提取(qu)后(hou)應盡快進(jin)(jin)行(xing)實驗。若不能馬上進(jin)(jin)行(xing)試驗，可將標(biao)本(ben)放于-20℃保存，但應避(bi)免反復(fu)凍(dong)融
2．不能檢(jian)測含NaN3的樣品(pin)，因NaN3抑制辣根過(guo)氧化(hua)物酶(mei)的（HRP）活性。
操作步驟:
1.加樣：標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)設(she)(she)定(ding)(ding)5個(ge)濃度(du)(du)點10個(ge)孔(kong)(kong)(kong)，每(mei)個(ge)濃度(du)(du)設(she)(she)定(ding)(ding)平行孔(kong)(kong)(kong)，加入(ru)50微(wei)升不(bu)同濃度(du)(du)的標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)，空白(bai)孔(kong)(kong)(kong)設(she)(she)定(ding)(ding)1個(ge)孔(kong)(kong)(kong)加入(ru)50微(wei)升蒸餾水（空白(bai)對照孔(kong)(kong)(kong)不(bu)加樣品(pin)(pin)及(ji)酶(mei)標(biao)試劑，其(qi)余各步操作(zuo)相同）、待(dai)測樣品(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)，在(zai)酶(mei)標(biao)包被(bei)板(ban)上待(dai)測樣品(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)先加樣品(pin)(pin)稀釋液40μl，然后再(zai)加待(dai)測樣品(pin)(pin)10μl（樣品(pin)(pin)最(zui)終稀釋度(du)(du)為5倍）。加樣將樣品(pin)(pin)加于酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)(kong)(kong)底(di)部，盡量(liang)不(bu)觸及(ji)孔(kong)(kong)(kong)壁(bi)，輕輕晃動混勻。
2.溫育：用(yong)封(feng)板膜封(feng)板后置37℃溫育30分鐘。
3.配液：將30（48T的20倍(bei)）倍(bei)濃縮(suo)洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍(bei)）倍(bei)稀(xi)釋(shi)后(hou)備用。
4.洗(xi)滌：小心揭(jie)掉封板膜(mo)，棄(qi)去(qu)液體，甩干，每孔加滿洗(xi)滌液，靜(jing)置30秒后棄(qi)去(qu)，如此重復5次，拍干。
5.加(jia)酶：每孔(kong)加(jia)入酶標試劑50μl，空白孔(kong)除外。
6.溫(wen)育：操作同2。
7.洗滌：操作同4。
8.顯色：每(mei)孔先加入(ru)顯色劑(ji)A50μl，再加入(ru)顯色劑(ji)B50μl，輕輕震(zhen)蕩混勻，37℃避(bi)光顯色15分鐘.
9.終止(zhi)：每孔加終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應（此時藍色立(li)轉(zhuan)黃(huang)色）。
10.測(ce)定：以空白空調零(ling)，450nm波長(chang)依序(xu)測(ce)量(liang)各孔(kong)的吸光(guang)度（OD值）。測(ce)定應在加終止液后15分鐘(zhong)以內進行。
注意事項：
1．試劑盒(he)從冷藏環境中(zhong)取出應在室溫平衡(heng)15-30分鐘(zhong)后方可使用(yong)，酶標包(bao)被板開封(feng)后如未用(yong)完，板條應裝入密(mi)封(feng)袋中(zhong)保存。
2．濃洗(xi)滌(di)液可能會有結(jie)晶(jing)析出(chu)，稀釋(shi)時(shi)可在(zai)水浴中加溫助溶，洗(xi)滌(di)時(shi)不(bu)影響結(jie)果(guo)。
3．各步加(jia)樣(yang)均應使(shi)(shi)用加(jia)樣(yang)器，并經常校(xiao)對其準(zhun)確性(xing)，以避免試(shi)驗(yan)誤差(cha)。一(yi)次加(jia)樣(yang)時間最好控制(zhi)在5分鐘內，如標本數量多，推薦使(shi)(shi)用排槍加(jia)樣(yang)。
4．請每次測定的(de)(de)同時(shi)做標(biao)準(zhun)曲線，最(zui)好做復孔。如標(biao)本中(zhong)待測物(wu)質含量(liang)過高（樣(yang)本OD值大于標(biao)準(zhun)品(pin)孔第一孔的(de)(de)OD值），請先用樣(yang)品(pin)稀釋液稀釋一定倍(bei)數（n倍(bei)）后再測定，計算時(shi)請最(zui)后乘(cheng)以總稀釋倍(bei)數（×n×5）。
5．封板膜只限一次(ci)性(xing)使用，以避免交叉(cha)污染。
6．底物請避光保存(cun)。
7．嚴格(ge)按照說(shuo)明書的操作進行，試(shi)驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣(yang)品，洗(xi)滌(di)液(ye)和各種廢棄物都應按(an)傳(chuan)染物處理。
9．本試劑不同批號組(zu)分不得(de)混用。
11.如與英(ying)文說明書有異，以英(ying)文說明書為準。
計算：
以(yi)標(biao)(biao)準(zhun)物的濃(nong)度為橫坐標(biao)(biao)，OD值(zhi)為縱坐標(biao)(biao)，在坐標(biao)(biao)紙(zhi)上繪出(chu)標(biao)(biao)準(zhun)曲線(xian)，根據樣(yang)品(pin)的OD
值(zhi)由標(biao)準曲線查出(chu)相應(ying)的濃度；再乘(cheng)以稀釋倍(bei)數；或用標(biao)準物的濃度與OD值(zhi)計(ji)算出(chu)標(biao)
準曲線的(de)直(zhi)線回歸(gui)方(fang)程(cheng)(cheng)式，將樣品的(de)OD值代入方(fang)程(cheng)(cheng)式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數(shu)，即為樣品的實際濃(nong)度。
試劑盒性能(neng)：
1.樣品線性回歸與預期濃度(du)相關系數R值(zhi)為0.990以上。
2.批內與(yu)批間應分別小(xiao)于9%和11%
保存條(tiao)件(jian)及有效期(qi)：
1.試(shi)劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
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