小鼠轉移生長因子-β1(TGF-β1)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
小鼠轉移生長因子-β1(TGF-β1)試(shi)劑盒(he)含量是固相夾心(xin)法酶(mei)聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待(dai)測(ce)物質濃(nong)度的(de)標準品、未(wei)知濃(nong)度的(de)樣品加入(ru)微孔酶(mei)標板內進行檢(jian)測(ce)。先(xian)將待(dai)測(ce)物質和生物素標記的(de)抗體同時(shi)溫(wen)育(yu)。洗(xi)滌后(hou)，加入(ru)親和素標記過的(de)HRP。再經過溫(wen)育(yu)和洗(xi)滌，去(qu)除未(wei)結合的(de)酶(mei)結合物，然后(hou)加入(ru)底物A、B，和酶(mei)結合物同時(shi)作用。產生顏(yan)色。顏(yan)色的(de)深淺和樣品中待(dai)測(ce)物質的(de)濃(nong)度呈比(bi)例(li)關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標(biao)準品用標(biao)準品稀釋(shi)液依次做倍比稀釋(shi)
標本要求：
1．標本采集后盡早進(jin)行(xing)提取(qu)，提取(qu)按相關文獻進(jin)行(xing)，提取(qu)后應盡快(kuai)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)(yan)。若不能(neng)馬(ma)上進(jin)行(xing)試(shi)驗(yan)(yan)，可將標本放(fang)于-20℃保存，但(dan)應避免反復凍融
2．不能檢測含(han)NaN3的樣(yang)品，因NaN3抑制辣根過氧(yang)化物酶(mei)的（HRP）活性(xing)。
操作步驟:
1.加(jia)樣(yang)(yang)：標(biao)準品(pin)設定5個濃度(du)(du)點10個孔(kong)(kong)(kong)，每個濃度(du)(du)設定平行孔(kong)(kong)(kong)，加(jia)入(ru)50微升不同(tong)濃度(du)(du)的(de)標(biao)準品(pin)，空(kong)白孔(kong)(kong)(kong)設定1個孔(kong)(kong)(kong)加(jia)入(ru)50微升蒸餾水（空(kong)白對照(zhao)孔(kong)(kong)(kong)不加(jia)樣(yang)(yang)品(pin)及酶標(biao)試劑(ji)，其余各步操作相同(tong)）、待測樣(yang)(yang)品(pin)孔(kong)(kong)(kong)，在酶標(biao)包(bao)被板上待測樣(yang)(yang)品(pin)孔(kong)(kong)(kong)中先(xian)加(jia)樣(yang)(yang)品(pin)稀釋液40μl，然后(hou)再(zai)加(jia)待測樣(yang)(yang)品(pin)10μl（樣(yang)(yang)品(pin)最終稀釋度(du)(du)為5倍）。加(jia)樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品(pin)加(jia)于酶標(biao)板孔(kong)(kong)(kong)底部，盡(jin)量不觸及孔(kong)(kong)(kong)壁(bi)，輕輕晃動混勻。
2.溫育(yu)：用封板(ban)膜封板(ban)后置(zhi)37℃溫育(yu)30分(fen)鐘。
3.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮(suo)洗滌液用(yong)蒸餾水30（48T的20倍）倍稀(xi)釋(shi)后備用(yong)。
4.洗滌(di)：小心揭掉封板膜，棄去液(ye)體，甩干，每(mei)孔加滿洗滌(di)液(ye)，靜置30秒(miao)后棄去，如此重復5次，拍(pai)干。
5.加酶(mei)：每孔加入酶(mei)標(biao)試(shi)劑50μl，空白(bai)孔除外(wai)。
6.溫(wen)育：操(cao)作同2。
7.洗(xi)滌：操作同(tong)4。
8.顯色(se)：每孔先加入顯色(se)劑A50μl，再加入顯色(se)劑B50μl，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻，37℃避光顯色(se)15分鐘.
9.終止(zhi)：每(mei)孔加終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反(fan)應(ying)（此(ci)時藍(lan)色立(li)轉黃色）。
10.測(ce)定：以(yi)空白空調零(ling)，450nm波長依序測(ce)量各孔的吸光度(du)（OD值）。測(ce)定應在加終止液后15分鐘以(yi)內(nei)進行。
注意事項：
1．試(shi)劑盒從(cong)冷(leng)藏環(huan)境中(zhong)取出應在(zai)室(shi)溫平衡15-30分(fen)鐘后方可使用(yong)，酶標包被板開封(feng)后如未(wei)用(yong)完，板條應裝入密封(feng)袋中(zhong)保存。
2．濃洗滌(di)液可能會有(you)結(jie)晶(jing)析出，稀釋時(shi)可在水浴(yu)中(zhong)加溫助溶，洗滌(di)時(shi)不影響結(jie)果。
3．各(ge)步(bu)加樣(yang)均應(ying)使用(yong)加樣(yang)器(qi)，并(bing)經(jing)常校對其準確(que)性(xing)，以避免試驗誤差(cha)。一次加樣(yang)時(shi)間最好(hao)控制在5分鐘內，如標本數量多(duo)，推薦使用(yong)排槍加樣(yang)。
4．請每次測(ce)定(ding)的同(tong)時做(zuo)標(biao)準曲(qu)線，最(zui)好做(zuo)復孔。如標(biao)本(ben)中待(dai)測(ce)物(wu)質含(han)量過高（樣(yang)本(ben)OD值大于標(biao)準品(pin)孔第一孔的OD值），請先(xian)用樣(yang)品(pin)稀釋液稀釋一定(ding)倍(bei)數（n倍(bei)）后再測(ce)定(ding)，計算時請最(zui)后乘以總(zong)稀釋倍(bei)數（×n×5）。
5．封(feng)板(ban)膜(mo)只限(xian)一(yi)次性使用，以避(bi)免交叉(cha)污染。
6．底(di)物請(qing)避光保存。
7．嚴格(ge)按照說明書(shu)的操(cao)作進行，試驗(yan)結(jie)果判定必須以(yi)酶標(biao)儀讀數為(wei)準.
8．所有樣(yang)品(pin)，洗滌液和各種(zhong)廢棄物都應按傳(chuan)染物處理(li)。
9．本試劑不同批號(hao)組分(fen)不得(de)混用。
11.如與(yu)英文說明(ming)書有異(yi)，以英文說明(ming)書為準。
計算：
以標(biao)準物的濃度為橫坐(zuo)標(biao)，OD值(zhi)為縱坐(zuo)標(biao)，在(zai)坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上繪(hui)出標(biao)準曲(qu)線，根據樣(yang)品的OD
值由標準曲線查出(chu)相應(ying)的濃度(du)；再乘以稀(xi)釋(shi)倍數；或用標準物的濃度(du)與OD值計(ji)算出(chu)標
準曲(qu)線的直線回歸方(fang)程式，將樣品(pin)的OD值代(dai)入方(fang)程式，計算出樣品(pin)濃度，再乘以稀(xi)釋
倍(bei)數，即為(wei)樣品的實際濃度(du)。
試劑盒性能：
1.樣品(pin)線性回歸與預期濃度(du)相關系數R值(zhi)為0.990以上。
2.批內與批間應分別小于9%和11%
保(bao)存條件(jian)及(ji)有效(xiao)期：
1.試(shi)劑盒保存：；2-8℃。
2．有(you)效期：6個月
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