大鼠轉移生長因子-β1(TGF-β1)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
大(da)鼠轉移生(sheng)長因子-β1(TGF-β1)試劑盒(he)含量是固相夾心法(fa)酶(mei)聯(lian)免疫吸附實驗（ELISA）.已知(zhi)(zhi)待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)濃度的(de)(de)(de)(de)標準品(pin)、未知(zhi)(zhi)濃度的(de)(de)(de)(de)樣品(pin)加(jia)入微孔酶(mei)標板內進行檢測(ce)。先將待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)和生(sheng)物(wu)素(su)(su)標記的(de)(de)(de)(de)抗體同(tong)時溫(wen)(wen)育(yu)。洗滌后，加(jia)入親(qin)和素(su)(su)標記過(guo)的(de)(de)(de)(de)HRP。再(zai)經(jing)過(guo)溫(wen)(wen)育(yu)和洗滌，去除(chu)未結合(he)(he)的(de)(de)(de)(de)酶(mei)結合(he)(he)物(wu)，然后加(jia)入底物(wu)A、B，和酶(mei)結合(he)(he)物(wu)同(tong)時作用。產(chan)生(sheng)顏色。顏色的(de)(de)(de)(de)深淺和樣品(pin)中待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)濃度呈比例(li)關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標準品用標準品稀(xi)釋液依次做(zuo)倍比稀(xi)釋
標本要求：
1．標本(ben)采集(ji)后盡早進行(xing)提(ti)取，提(ti)取按相(xiang)關文獻進行(xing)，提(ti)取后應盡快(kuai)進行(xing)實驗。若不能馬上進行(xing)試驗，可將(jiang)標本(ben)放(fang)于(yu)-20℃保存，但應避(bi)免反復(fu)凍融
2．不能檢(jian)測含NaN3的樣品(pin)，因NaN3抑制(zhi)辣根(gen)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶的（HRP）活(huo)性。
操作步驟:
1.加(jia)樣(yang)(yang)：標準(zhun)品設定(ding)(ding)5個(ge)(ge)(ge)濃度點10個(ge)(ge)(ge)孔(kong)(kong)，每(mei)個(ge)(ge)(ge)濃度設定(ding)(ding)平行(xing)孔(kong)(kong)，加(jia)入(ru)(ru)50微升(sheng)不(bu)同(tong)濃度的標準(zhun)品，空(kong)白(bai)孔(kong)(kong)設定(ding)(ding)1個(ge)(ge)(ge)孔(kong)(kong)加(jia)入(ru)(ru)50微升(sheng)蒸餾水（空(kong)白(bai)對照孔(kong)(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)(yang)品及酶標試劑，其余各步操(cao)作相同(tong)）、待測(ce)樣(yang)(yang)品孔(kong)(kong)，在酶標包被(bei)板上待測(ce)樣(yang)(yang)品孔(kong)(kong)中先加(jia)樣(yang)(yang)品稀(xi)釋(shi)(shi)液40μl，然后(hou)再加(jia)待測(ce)樣(yang)(yang)品10μl（樣(yang)(yang)品最終稀(xi)釋(shi)(shi)度為(wei)5倍）。加(jia)樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品加(jia)于酶標板孔(kong)(kong)底部(bu)，盡量不(bu)觸及孔(kong)(kong)壁，輕輕晃動(dong)混勻(yun)。
2.溫育：用封板膜封板后(hou)置(zhi)37℃溫育30分(fen)鐘。
3.配液(ye)：將30（48T的20倍(bei)(bei)）倍(bei)(bei)濃縮(suo)洗滌液(ye)用蒸餾水30（48T的20倍(bei)(bei)）倍(bei)(bei)稀釋(shi)后備(bei)用。
4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄(qi)去液體，甩(shuai)干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄(qi)去，如此重復5次，拍干。
5.加(jia)(jia)酶：每孔加(jia)(jia)入酶標試劑50μl，空白孔除(chu)外。
6.溫育：操作同2。
7.洗(xi)滌：操作同4。
8.顯色：每孔(kong)先加(jia)入(ru)顯色劑A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯色劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
9.終(zhong)止：每孔加終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應（此時藍(lan)色立(li)轉黃色）。
10.測定(ding)：以空白空調(diao)零(ling)，450nm波長依序測量(liang)各孔的吸(xi)光度（OD值(zhi)）。測定(ding)應在加終止液后(hou)15分鐘以內進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷(leng)藏環(huan)境中取出(chu)應(ying)在室(shi)溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板(ban)開封后如未用完，板(ban)條(tiao)應(ying)裝入(ru)密封袋中保(bao)存。
2．濃洗滌液可(ke)(ke)能會(hui)有結晶析出，稀釋時(shi)可(ke)(ke)在水浴中加溫(wen)助溶，洗滌時(shi)不(bu)影響結果。
3．各(ge)步(bu)加(jia)(jia)樣均應使用(yong)加(jia)(jia)樣器，并經(jing)常校對(dui)其準確(que)性(xing)，以避免試驗誤差。一次加(jia)(jia)樣時間最好(hao)控制(zhi)在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用(yong)排槍加(jia)(jia)樣。
4．請(qing)每次測(ce)定的(de)同時(shi)做(zuo)標(biao)(biao)準(zhun)曲線，最(zui)好做(zuo)復孔(kong)。如標(biao)(biao)本中待測(ce)物(wu)質含(han)量過高（樣本OD值大于標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)第一孔(kong)的(de)OD值），請(qing)先用樣品(pin)稀釋(shi)液稀釋(shi)一定倍數（n倍）后再測(ce)定，計算時(shi)請(qing)最(zui)后乘以總稀釋(shi)倍數（×n×5）。
5．封板膜只(zhi)限一次(ci)性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存(cun)。
7．嚴格按(an)照說明書的操作(zuo)進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣(yang)品，洗(xi)滌(di)液和各種廢棄物都(dou)應按傳染物處理。
9．本試劑(ji)不同(tong)批(pi)號組(zu)分不得混用。
11.如與(yu)英文(wen)說(shuo)(shuo)明(ming)書有異，以英文(wen)說(shuo)(shuo)明(ming)書為準。
計算：
以標(biao)準物的濃度為(wei)橫坐標(biao)，OD值為(wei)縱坐標(biao)，在坐標(biao)紙上繪出(chu)標(biao)準曲線，根據(ju)樣品的OD
值由標準曲線查出相應的濃度(du)；再乘以稀釋(shi)倍數；或用標準物的濃度(du)與OD值計算出標
準曲(qu)線的(de)直線回歸(gui)方程式，將樣(yang)品的(de)OD值代(dai)入方程式，計算出(chu)樣(yang)品濃(nong)度(du)，再乘以稀釋(shi)
倍數，即為樣品的(de)實際(ji)濃度。
試劑(ji)盒(he)性(xing)能：
1.樣品線性回歸(gui)與預期濃度相關系數(shu)R值為0.990以上。
2.批(pi)內與批(pi)間應分別小于9%和11%
保存(cun)條件(jian)及有(you)效期：
1.試劑盒(he)保存(cun)：；2-8℃。
2．有效(xiao)期：6個月
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