人轉移生長因子-β1(TGF-β1)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
人轉移生長(chang)因子-β1(TGF-β1)試劑盒含(han)量是固(gu)相(xiang)夾(jia)心法(fa)酶聯(lian)免疫吸附實(shi)驗(yan)（ELISA）.已(yi)知待測(ce)物(wu)(wu)(wu)質濃(nong)度(du)的(de)(de)(de)標(biao)準(zhun)品、未知濃(nong)度(du)的(de)(de)(de)樣(yang)(yang)品加入微孔酶標(biao)板內進行檢測(ce)。先將待測(ce)物(wu)(wu)(wu)質和(he)生物(wu)(wu)(wu)素(su)標(biao)記的(de)(de)(de)抗(kang)體(ti)同(tong)時溫育(yu)。洗滌后，加入親和(he)素(su)標(biao)記過(guo)的(de)(de)(de)HRP。再經過(guo)溫育(yu)和(he)洗滌，去除未結(jie)合的(de)(de)(de)酶結(jie)合物(wu)(wu)(wu)，然(ran)后加入底物(wu)(wu)(wu)A、B，和(he)酶結(jie)合物(wu)(wu)(wu)同(tong)時作(zuo)用。產生顏色。顏色的(de)(de)(de)深淺和(he)樣(yang)(yang)品中待測(ce)物(wu)(wu)(wu)質的(de)(de)(de)濃(nong)度(du)呈比例關(guan)系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標準(zhun)品用標準(zhun)品稀(xi)釋液依次做(zuo)倍比(bi)稀(xi)釋
標本要求：
1．標本采集后盡(jin)早進(jin)行(xing)(xing)提取(qu)，提取(qu)按相(xiang)關文獻進(jin)行(xing)(xing)，提取(qu)后應盡(jin)快進(jin)行(xing)(xing)實驗。若不能馬(ma)上(shang)進(jin)行(xing)(xing)試驗，可將標本放于-20℃保(bao)存，但應避免反復凍融
2．不能檢(jian)測含NaN3的樣品，因(yin)NaN3抑制(zhi)辣根(gen)過(guo)氧化物(wu)酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.加(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)：標準(zhun)品設(she)定5個(ge)濃度(du)(du)點(dian)10個(ge)孔，每個(ge)濃度(du)(du)設(she)定平行孔，加(jia)入(ru)50微升(sheng)不同濃度(du)(du)的標準(zhun)品，空白孔設(she)定1個(ge)孔加(jia)入(ru)50微升(sheng)蒸餾(liu)水（空白對照孔不加(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品及(ji)酶(mei)(mei)標試劑(ji)，其余各步操作相(xiang)同）、待(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品孔，在酶(mei)(mei)標包被(bei)板上待(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品孔中先加(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品稀(xi)釋(shi)液40μl，然后再加(jia)待(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品10μl（樣(yang)(yang)(yang)(yang)品最(zui)終(zhong)稀(xi)釋(shi)度(du)(du)為(wei)5倍）。加(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)(yang)品加(jia)于酶(mei)(mei)標板孔底部，盡量不觸及(ji)孔壁，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混(hun)勻。
2.溫育(yu)：用封板膜封板后置37℃溫育(yu)30分鐘。
3.配液(ye)：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液(ye)用蒸餾(liu)水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
4.洗滌(di)：小心揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜，棄去液(ye)體，甩干，每孔加(jia)滿(man)洗滌(di)液(ye)，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
5.加(jia)酶：每孔(kong)加(jia)入酶標試劑50μl，空白孔(kong)除外。
6.溫育：操作(zuo)同2。
7.洗滌(di)：操(cao)作同4。
8.顯(xian)(xian)色：每孔先加入(ru)顯(xian)(xian)色劑(ji)A50μl，再加入(ru)顯(xian)(xian)色劑(ji)B50μl，輕輕震(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃避光顯(xian)(xian)色15分鐘.
9.終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔加終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反應（此時(shi)藍色(se)立轉黃色(se)）。
10.測(ce)定：以空白空調零，450nm波長(chang)依序(xu)測(ce)量各孔的吸光度（OD值(zhi)）。測(ce)定應在加終止液(ye)后15分鐘(zhong)以內進(jin)行。
注意事項：
1．試劑盒從(cong)冷(leng)藏環境中取出應(ying)在(zai)室(shi)溫平衡15-30分鐘(zhong)后方可使用(yong)，酶標(biao)包(bao)被板(ban)開封后如未用(yong)完，板(ban)條應(ying)裝(zhuang)入(ru)密封袋中保存。
2．濃(nong)洗滌(di)液(ye)可(ke)能會有結晶析(xi)出，稀釋時(shi)可(ke)在水(shui)浴中(zhong)加(jia)溫助溶，洗滌(di)時(shi)不影響結果。
3．各步加(jia)樣均應使(shi)用(yong)加(jia)樣器，并(bing)經(jing)常校對其準確(que)性，以避免試驗(yan)誤差。一(yi)次加(jia)樣時(shi)間(jian)最好控制(zhi)在5分鐘內，如標(biao)本數量多(duo)，推薦使(shi)用(yong)排(pai)槍加(jia)樣。
4．請(qing)每次測(ce)定的(de)同時做(zuo)標(biao)準(zhun)(zhun)曲線，最(zui)好做(zuo)復孔(kong)。如標(biao)本中待測(ce)物質含量過高（樣(yang)(yang)本OD值大(da)于標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)孔(kong)第一孔(kong)的(de)OD值），請(qing)先用樣(yang)(yang)品(pin)稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測(ce)定，計算時請(qing)最(zui)后乘以(yi)總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜(mo)只(zhi)限(xian)一次性(xing)使用，以避免交叉污染(ran)。
6．底(di)物請避光(guang)保(bao)存。
7．嚴格(ge)按照說明書的(de)操作進行，試(shi)驗結果(guo)判定必須以酶標儀(yi)讀數為(wei)準(zhun).
8．所(suo)有樣(yang)品，洗滌液和各種廢棄物都(dou)應按傳染物處(chu)理。
9．本試(shi)劑不同批號組分(fen)不得(de)混用。
11.如與英文說(shuo)明(ming)書有異，以英文說(shuo)明(ming)書為準(zhun)。
計算：
以(yi)標(biao)準物的(de)濃度為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)，OD值為(wei)縱坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙上繪出標(biao)準曲線，根據樣品(pin)的(de)OD
值由標(biao)準曲線(xian)查(cha)出(chu)相應的濃度(du)(du)；再乘以(yi)稀釋倍數；或用標(biao)準物的濃度(du)(du)與OD值計算出(chu)標(biao)
準(zhun)曲線(xian)的(de)直線(xian)回(hui)歸(gui)方(fang)程式，將樣(yang)品的(de)OD值代入方(fang)程式，計算出樣(yang)品濃度，再乘以稀釋
倍數，即為樣(yang)品的實際(ji)濃度。
試(shi)劑盒(he)性(xing)能：
1.樣品線性回歸與預(yu)期濃度相關(guan)系數(shu)R值為0.990以(yi)上。
2.批內與(yu)批間應(ying)分(fen)別小于(yu)9%和11%
保存(cun)條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效(xiao)期：6個月
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