兔轉移生長因子-β1(TGF-β1)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
兔(tu)轉移生長因子-β1(TGF-β1)試劑盒含量是固相(xiang)夾心法(fa)酶(mei)聯免疫(yi)吸附(fu)實驗(yan)（ELISA）.已知待(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)質濃度(du)的(de)(de)標(biao)(biao)(biao)準品(pin)(pin)、未知濃度(du)的(de)(de)樣(yang)品(pin)(pin)加(jia)入(ru)微孔(kong)酶(mei)標(biao)(biao)(biao)板(ban)內進行檢測(ce)(ce)。先(xian)將待(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)質和(he)(he)生物(wu)(wu)素(su)標(biao)(biao)(biao)記的(de)(de)抗體同(tong)時(shi)溫(wen)育。洗滌后(hou)，加(jia)入(ru)親(qin)和(he)(he)素(su)標(biao)(biao)(biao)記過的(de)(de)HRP。再經過溫(wen)育和(he)(he)洗滌，去(qu)除未結合的(de)(de)酶(mei)結合物(wu)(wu)，然后(hou)加(jia)入(ru)底物(wu)(wu)A、B，和(he)(he)酶(mei)結合物(wu)(wu)同(tong)時(shi)作(zuo)用。產生顏色(se)。顏色(se)的(de)(de)深淺和(he)(he)樣(yang)品(pin)(pin)中待(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)質的(de)(de)濃度(du)呈(cheng)比例關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注(zhu)：標準(zhun)品(pin)(pin)用標準(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)釋液(ye)依次做(zuo)倍比稀(xi)釋
標本要求：
1．標本采集后盡(jin)早進行(xing)(xing)提(ti)(ti)取(qu)，提(ti)(ti)取(qu)按相關文獻進行(xing)(xing)，提(ti)(ti)取(qu)后應盡(jin)快(kuai)進行(xing)(xing)實(shi)驗。若不能馬上進行(xing)(xing)試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑制辣根(gen)過氧化物(wu)酶的(de)（HRP）活性。
操作步驟:
1.加(jia)樣(yang)：標(biao)(biao)準品(pin)設定(ding)(ding)5個濃(nong)度(du)點10個孔(kong)(kong)，每個濃(nong)度(du)設定(ding)(ding)平(ping)行孔(kong)(kong)，加(jia)入50微(wei)升不同濃(nong)度(du)的標(biao)(biao)準品(pin)，空白孔(kong)(kong)設定(ding)(ding)1個孔(kong)(kong)加(jia)入50微(wei)升蒸餾水（空白對(dui)照孔(kong)(kong)不加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶(mei)(mei)標(biao)(biao)試劑，其(qi)余各步(bu)操作相同）、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)(kong)，在酶(mei)(mei)標(biao)(biao)包被板上待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)(kong)中先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然后再(zai)加(jia)待(dai)測樣(yang)品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)最(zui)終稀(xi)釋(shi)度(du)為5倍）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品(pin)加(jia)于(yu)酶(mei)(mei)標(biao)(biao)板孔(kong)(kong)底部，盡量不觸及(ji)孔(kong)(kong)壁，輕輕晃動混勻。
2.溫育(yu)(yu)：用封(feng)板膜封(feng)板后置(zhi)37℃溫育(yu)(yu)30分鐘。
3.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗(xi)滌(di)液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
4.洗滌(di)：小(xiao)心揭掉封板(ban)膜，棄去(qu)液體，甩(shuai)干(gan)(gan)，每孔加滿洗滌(di)液，靜(jing)置(zhi)30秒后(hou)棄去(qu)，如此重(zhong)復5次(ci)，拍(pai)干(gan)(gan)。
5.加酶：每孔(kong)(kong)加入(ru)酶標試劑50μl，空白孔(kong)(kong)除外。
6.溫育：操作同(tong)2。
7.洗滌：操(cao)作同4。
8.顯(xian)(xian)(xian)色(se)：每孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯(xian)(xian)(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)(xian)(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯(xian)(xian)(xian)色(se)15分鐘.
9.終止：每孔(kong)加終止液(ye)50μl，終止反(fan)應（此時藍色立轉(zhuan)黃色）。
10.測定(ding)：以空(kong)白(bai)空(kong)調零，450nm波長依序測量各(ge)孔(kong)的(de)吸光度（OD值）。測定(ding)應在加終(zhong)止液后15分鐘以內進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室(shi)溫平衡15-30分鐘后(hou)方(fang)可使用(yong)，酶(mei)標包被(bei)板開封后(hou)如未用(yong)完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌(di)(di)液(ye)可能會有結晶析(xi)出，稀(xi)釋時可在水浴中加(jia)溫助溶，洗滌(di)(di)時不(bu)影響結果(guo)。
3．各步(bu)加(jia)(jia)樣均應使用加(jia)(jia)樣器(qi)，并經常校對其準確性，以避免試驗(yan)誤差。一(yi)次加(jia)(jia)樣時間最好控制在5分鐘內，如標(biao)本數量多，推薦使用排槍加(jia)(jia)樣。
4．請每次測(ce)定(ding)的(de)同時做標準曲線，最(zui)好做復孔。如標本(ben)中待測(ce)物質含量過高（樣本(ben)OD值(zhi)大于標準品孔第一孔的(de)OD值(zhi)），請先用樣品稀釋(shi)液稀釋(shi)一定(ding)倍數（n倍）后(hou)再測(ce)定(ding)，計算(suan)時請最(zui)后(hou)乘以總稀釋(shi)倍數（×n×5）。
5．封板膜只(zhi)限(xian)一次性使用，以避免(mian)交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格(ge)按(an)照說(shuo)明書(shu)的操(cao)作(zuo)進行，試驗結果判定(ding)必須以酶標儀讀數為準.
8．所(suo)有樣品(pin)，洗(xi)滌液(ye)和各種廢棄物(wu)都應按傳染物(wu)處(chu)理。
9．本試劑不(bu)同批號組分(fen)不(bu)得混用。
11.如與英(ying)文(wen)說明書(shu)有異(yi)，以(yi)英(ying)文(wen)說明書(shu)為準。
計算：
以標準(zhun)物的濃度為橫(heng)坐標，OD值為縱(zong)坐標，在坐標紙上繪(hui)出標準(zhun)曲線(xian)，根據(ju)樣品的OD
值(zhi)由標準曲線查出相應的濃度；再乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍(bei)數；或用標準物的濃度與OD值(zhi)計算出標
準曲線的(de)直(zhi)線回歸方(fang)程(cheng)式，將樣(yang)品的(de)OD值代入方(fang)程(cheng)式，計算出樣(yang)品濃度，再乘以稀釋
倍數，即(ji)為樣品的實際濃度。
試劑(ji)盒性能：
1.樣品線(xian)性回歸與(yu)預期濃度相(xiang)關系數R值為0.990以上。
2.批內與批間應分別小于9%和11%
保存條件(jian)及有效期：
1.試劑盒(he)保存(cun)：；2-8℃。
2．有效期：6個月
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