人可溶性血管細胞粘附因子1（sVCAM-1）酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
人可溶(rong)性血管(guan)細(xi)胞(bao)粘附(fu)因(yin)子1（sVCAM-1）試劑(ji)盒(he)含量是固相夾(jia)心法酶(mei)聯免疫吸附(fu)實驗（ELISA）.已(yi)知待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)濃度(du)(du)的(de)標準(zhun)品、未知濃度(du)(du)的(de)樣(yang)品加(jia)入(ru)微孔酶(mei)標板內進行檢測(ce)。先將待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)和(he)生物(wu)素標記的(de)抗體同時溫(wen)育。洗滌后，加(jia)入(ru)親和(he)素標記過的(de)HRP。再經過溫(wen)育和(he)洗滌，去(qu)除未結合(he)的(de)酶(mei)結合(he)物(wu)，然(ran)后加(jia)入(ru)底物(wu)A、B，和(he)酶(mei)結合(he)物(wu)同時作用。產生顏(yan)色。顏(yan)色的(de)深淺和(he)樣(yang)品中待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)的(de)濃度(du)(du)呈比(bi)例關系(xi)。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標(biao)準(zhun)品(pin)用標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye)依(yi)次做倍比稀釋(shi)
標本要求：
1．標本采集后盡(jin)早進行(xing)提取，提取按相關文獻進行(xing)，提取后應盡(jin)快進行(xing)實(shi)驗(yan)(yan)。若不能馬(ma)上(shang)進行(xing)試(shi)驗(yan)(yan)，可將標本放(fang)于-20℃保存(cun)，但(dan)應避免反復凍融
2．不能(neng)檢(jian)測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)：標準(zhun)品設(she)定5個濃度(du)點10個孔(kong)(kong)(kong)，每(mei)個濃度(du)設(she)定平行孔(kong)(kong)(kong)，加(jia)(jia)(jia)(jia)入50微升不同(tong)濃度(du)的標準(zhun)品，空白(bai)孔(kong)(kong)(kong)設(she)定1個孔(kong)(kong)(kong)加(jia)(jia)(jia)(jia)入50微升蒸(zheng)餾水(shui)（空白(bai)對(dui)照孔(kong)(kong)(kong)不加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)品及(ji)酶標試劑，其余各步(bu)操作相同(tong)）、待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品孔(kong)(kong)(kong)，在酶標包被板上待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品孔(kong)(kong)(kong)中先加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)品稀釋液(ye)40μl，然(ran)后再加(jia)(jia)(jia)(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品10μl（樣(yang)(yang)品最終(zhong)稀釋度(du)為5倍）。加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)將(jiang)樣(yang)(yang)品加(jia)(jia)(jia)(jia)于(yu)酶標板孔(kong)(kong)(kong)底部(bu)，盡量不觸及(ji)孔(kong)(kong)(kong)壁，輕輕晃動混勻。
2.溫育：用(yong)封板(ban)膜(mo)封板(ban)后(hou)置37℃溫育30分鐘。
3.配液：將(jiang)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌液用蒸餾水30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀釋后備用。
4.洗滌(di)：小心(xin)揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜，棄去液(ye)體(ti)，甩(shuai)干，每孔加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜(jing)置(zhi)30秒后(hou)棄去，如此重復(fu)5次，拍(pai)干。
5.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白(bai)孔除(chu)外(wai)。
6.溫育：操作同2。
7.洗滌(di)：操作同(tong)4。
8.顯色(se)：每孔先加入(ru)顯色(se)劑A50μl，再加入(ru)顯色(se)劑B50μl，輕輕震蕩混勻(yun)，37℃避光顯色(se)15分鐘.
9.終止：每(mei)孔加終止液50μl，終止反應（此(ci)時藍色立轉(zhuan)黃色）。
10.測(ce)定(ding)：以空白空調零，450nm波長(chang)依(yi)序測(ce)量各孔的吸光度（OD值）。測(ce)定(ding)應在加終(zhong)止液后15分(fen)鐘以內(nei)進行。
注意事項：
1．試劑(ji)盒從冷藏環境中取出應(ying)在室(shi)溫(wen)平衡15-30分鐘后方(fang)可(ke)使用(yong)(yong)，酶(mei)標包被板(ban)開(kai)封后如未(wei)用(yong)(yong)完，板(ban)條應(ying)裝入(ru)密(mi)封袋中保存。
2．濃洗(xi)滌液(ye)可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗(xi)滌時不(bu)影響結果(guo)。
3．各步加(jia)(jia)樣(yang)均應使(shi)用加(jia)(jia)樣(yang)器，并經常(chang)校(xiao)對其準確(que)性，以避免試驗誤差。一次加(jia)(jia)樣(yang)時間最好(hao)控制在5分鐘內，如標(biao)本(ben)數量多，推薦使(shi)用排槍(qiang)加(jia)(jia)樣(yang)。
4．請(qing)每次測定的(de)同時(shi)做(zuo)標準曲線，最(zui)好做(zuo)復孔。如標本(ben)中待測物質含量(liang)過高（樣(yang)本(ben)OD值大(da)于標準品孔第(di)一孔的(de)OD值），請(qing)先用樣(yang)品稀(xi)釋液(ye)稀(xi)釋一定倍(bei)(bei)數（n倍(bei)(bei)）后再(zai)測定，計(ji)算時(shi)請(qing)最(zui)后乘以總稀(xi)釋倍(bei)(bei)數（×n×5）。
5．封板(ban)膜(mo)只限一次(ci)性使用，以避免交叉污(wu)染。
6．底物(wu)請避光(guang)保存。
7．嚴格按照說明(ming)書的操作進(jin)行(xing)，試驗結果判(pan)定(ding)必須以(yi)酶(mei)標儀(yi)讀數為準(zhun).
8．所有樣品(pin)，洗滌液和各(ge)種廢棄物都應按傳染(ran)物處理。
9．本試劑(ji)不(bu)同批號組分不(bu)得混用。
11.如與(yu)英文說明書(shu)有異，以英文說明書(shu)為準。
計算：
以標(biao)(biao)準(zhun)物的濃度為橫坐標(biao)(biao)，OD值為縱(zong)坐標(biao)(biao)，在坐標(biao)(biao)紙上繪出標(biao)(biao)準(zhun)曲線，根據樣品的OD
值由標(biao)準(zhun)曲線查出相應的(de)濃(nong)度(du)；再乘(cheng)以(yi)稀釋倍數；或用標(biao)準(zhun)物的(de)濃(nong)度(du)與OD值計算出標(biao)
準曲(qu)線(xian)的直線(xian)回歸(gui)方程(cheng)式(shi)，將樣(yang)品的OD值代入方程(cheng)式(shi)，計算出(chu)樣(yang)品濃度，再乘以(yi)稀(xi)釋
倍數，即為樣品的實際濃度。
試劑盒性(xing)能：
1.樣品(pin)線(xian)性回歸(gui)與預期濃(nong)度相關系數R值為0.990以(yi)上。
2.批(pi)內與(yu)批(pi)間應(ying)分別小(xiao)于(yu)9%和11%
保存條(tiao)件及有效(xiao)期：
1.試劑(ji)盒(he)保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
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