人尿酸（UA）酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
人尿(niao)酸（UA）試劑盒(he)含量是固相(xiang)夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已(yi)知待(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)質(zhi)濃度的(de)標準品、未知濃度的(de)樣(yang)品加(jia)(jia)入微孔酶標板內(nei)進行(xing)檢測(ce)(ce)。先(xian)將(jiang)待(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)質(zhi)和(he)(he)生(sheng)物(wu)(wu)素(su)標記的(de)抗體同(tong)時溫育。洗滌(di)后，加(jia)(jia)入親(qin)和(he)(he)素(su)標記過(guo)的(de)HRP。再經(jing)過(guo)溫育和(he)(he)洗滌(di)，去除未結(jie)合(he)(he)的(de)酶結(jie)合(he)(he)物(wu)(wu)，然后加(jia)(jia)入底物(wu)(wu)A、B，和(he)(he)酶結(jie)合(he)(he)物(wu)(wu)同(tong)時作(zuo)用。產生(sheng)顏色。顏色的(de)深淺(qian)和(he)(he)樣(yang)品中(zhong)待(dai)測(ce)(ce)物(wu)(wu)質(zhi)的(de)濃度呈比(bi)例關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標準(zhun)品(pin)(pin)用標準(zhun)品(pin)(pin)稀釋液依次做倍(bei)比稀釋
標本要求：
1．標本采集后(hou)盡早進(jin)行提(ti)取(qu)(qu)，提(ti)取(qu)(qu)按相關文(wen)獻(xian)進(jin)行，提(ti)取(qu)(qu)后(hou)應(ying)盡快進(jin)行實驗(yan)。若不能馬上進(jin)行試(shi)驗(yan)，可將標本放于-20℃保(bao)存，但應(ying)避免反復凍融
2．不能檢測(ce)含NaN3的樣品，因(yin)NaN3抑制(zhi)辣根過(guo)氧化(hua)物酶的（HRP）活性(xing)。
操作步驟:
1.加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)：標準(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)設(she)定(ding)5個濃度(du)(du)點10個孔(kong)(kong)(kong)(kong)，每個濃度(du)(du)設(she)定(ding)平行孔(kong)(kong)(kong)(kong)，加(jia)(jia)入50微(wei)升不(bu)(bu)同(tong)濃度(du)(du)的標準(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)，空白孔(kong)(kong)(kong)(kong)設(she)定(ding)1個孔(kong)(kong)(kong)(kong)加(jia)(jia)入50微(wei)升蒸餾水（空白對照孔(kong)(kong)(kong)(kong)不(bu)(bu)加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)及酶標試劑，其余各步操作相同(tong)）、待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)(kong)，在酶標包被板上待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)(kong)中先加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)稀釋液(ye)40μl，然后再加(jia)(jia)待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)最(zui)終(zhong)稀釋度(du)(du)為5倍(bei)）。加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)加(jia)(jia)于(yu)酶標板孔(kong)(kong)(kong)(kong)底部，盡量不(bu)(bu)觸及孔(kong)(kong)(kong)(kong)壁(bi)，輕輕晃動混(hun)勻。
2.溫育(yu)(yu)：用封板膜封板后置37℃溫育(yu)(yu)30分(fen)鐘。
3.配液：將30（48T的(de)20倍）倍濃縮洗(xi)滌液用(yong)蒸餾(liu)水30（48T的(de)20倍）倍稀釋后(hou)備用(yong)。
4.洗滌：小心揭掉封板膜，棄(qi)去液(ye)體(ti)，甩(shuai)干，每孔(kong)加滿洗滌液(ye)，靜置30秒后棄(qi)去，如此(ci)重(zhong)復(fu)5次，拍干。
5.加酶：每孔(kong)加入酶標(biao)試劑50μl，空白孔(kong)除外。
6.溫育：操作同(tong)2。
7.洗滌：操作同4。
8.顯(xian)(xian)色：每孔先(xian)加入顯(xian)(xian)色劑A50μl，再加入顯(xian)(xian)色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光(guang)顯(xian)(xian)色15分鐘.
9.終止(zhi)：每孔(kong)加終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應(ying)（此時藍色立轉黃色）。
10.測(ce)定(ding)：以空白空調零，450nm波長依序測(ce)量各孔的(de)吸(xi)光度（OD值）。測(ce)定(ding)應(ying)在加終止液后(hou)15分鐘以內進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷(leng)藏環境(jing)中取出應(ying)在(zai)室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包(bao)被板(ban)開封后如未用完，板(ban)條應(ying)裝入密(mi)封袋中保存。
2．濃洗滌液可(ke)能會有結晶析出，稀釋(shi)時(shi)(shi)可(ke)在(zai)水浴中加溫助(zhu)溶，洗滌時(shi)(shi)不影響結果。
3．各步加(jia)樣均應(ying)使用加(jia)樣器，并經常校(xiao)對(dui)其準確性(xing)，以避(bi)免試(shi)驗誤差(cha)。一次加(jia)樣時間最好控制在(zai)5分鐘內，如標(biao)本數(shu)量多，推(tui)薦使用排槍加(jia)樣。
4．請每次測定的同時(shi)做標準曲線，最好做復(fu)孔。如標本(ben)中待測物質含量過高（樣(yang)本(ben)OD值(zhi)大于標準品孔第一孔的OD值(zhi)），請先(xian)用樣(yang)品稀釋液稀釋一定倍(bei)數（n倍(bei)）后再測定，計算時(shi)請最后乘以總稀釋倍(bei)數（×n×5）。
5．封板(ban)膜只限一(yi)次性使用，以避免交(jiao)叉污染。
6．底(di)物請避(bi)光保(bao)存。
7．嚴格按照說明(ming)書的(de)操作進行(xing)，試(shi)驗(yan)結果判定必須(xu)以酶標儀讀數為準(zhun).
8．所有(you)樣(yang)品，洗滌(di)液和各種廢棄(qi)物(wu)都應(ying)按傳染物(wu)處理。
9．本試劑不同(tong)批號(hao)組(zu)分不得(de)混用。
11.如與(yu)英文說(shuo)明書有異，以英文說(shuo)明書為準。
計算：
以標準物的(de)濃度為橫坐標，OD值為縱(zong)坐標，在坐標紙上繪(hui)出標準曲線，根(gen)據樣品的(de)OD
值由(you)標準曲(qu)線(xian)查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與(yu)OD值計算出標
準曲線的(de)直線回歸方(fang)程(cheng)式(shi)，將樣(yang)品的(de)OD值代(dai)入方(fang)程(cheng)式(shi)，計算出(chu)樣(yang)品濃(nong)度(du)，再乘以稀(xi)釋
倍數，即為樣品的實際(ji)濃度。
試劑(ji)盒性能：
1.樣品(pin)線性(xing)回歸與預期濃度相關系數R值為0.990以上。
2.批內與批間應(ying)分別小(xiao)于9%和(he)11%
保存條件及有(you)效期：
1.試劑(ji)盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
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