大鼠纖連蛋白(FN)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
大鼠纖(xian)連(lian)蛋(dan)白(FN)試劑(ji)盒含量是固相(xiang)夾心法酶(mei)(mei)聯免疫吸(xi)附(fu)實驗（ELISA）.已知待測(ce)物(wu)(wu)質濃度(du)的(de)標(biao)準品(pin)(pin)、未(wei)知濃度(du)的(de)樣(yang)品(pin)(pin)加入微孔酶(mei)(mei)標(biao)板內進行檢測(ce)。先將待測(ce)物(wu)(wu)質和(he)(he)生(sheng)物(wu)(wu)素(su)標(biao)記的(de)抗體同時(shi)(shi)溫(wen)育(yu)。洗滌(di)后(hou)，加入親和(he)(he)素(su)標(biao)記過的(de)HRP。再經過溫(wen)育(yu)和(he)(he)洗滌(di)，去(qu)除未(wei)結合的(de)酶(mei)(mei)結合物(wu)(wu)，然后(hou)加入底物(wu)(wu)A、B，和(he)(he)酶(mei)(mei)結合物(wu)(wu)同時(shi)(shi)作用。產生(sheng)顏(yan)(yan)色(se)。顏(yan)(yan)色(se)的(de)深淺和(he)(he)樣(yang)品(pin)(pin)中待測(ce)物(wu)(wu)質的(de)濃度(du)呈比例(li)關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標準品用標準品稀釋液依次(ci)做倍比稀釋
標本要求：
1．標本(ben)采集(ji)后(hou)盡早進(jin)(jin)(jin)行(xing)提取，提取按(an)相關文獻進(jin)(jin)(jin)行(xing)，提取后(hou)應盡快(kuai)進(jin)(jin)(jin)行(xing)實驗。若(ruo)不能馬上(shang)進(jin)(jin)(jin)行(xing)試驗，可將標本(ben)放于-20℃保存，但應避免(mian)反復凍融(rong)
2．不能檢測含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑制辣(la)根過氧化物酶的(de)（HRP）活性。
操作步驟:
1.加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)：標準(zhun)品(pin)(pin)設(she)定5個(ge)濃度點10個(ge)孔(kong)，每個(ge)濃度設(she)定平行孔(kong)，加(jia)(jia)入(ru)50微升不同(tong)濃度的標準(zhun)品(pin)(pin)，空白孔(kong)設(she)定1個(ge)孔(kong)加(jia)(jia)入(ru)50微升蒸(zheng)餾水(shui)（空白對(dui)照孔(kong)不加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)及酶標試劑，其余各步操作相同(tong)）、待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)，在酶標包被板(ban)上待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)中先加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)稀釋液40μl，然后再加(jia)(jia)待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)最終(zhong)稀釋度為5倍）。加(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)將(jiang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)加(jia)(jia)于酶標板(ban)孔(kong)底部，盡(jin)量不觸(chu)及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃動(dong)混勻。
2.溫(wen)育：用(yong)封板膜封板后(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。
3.配液：將30（48T的20倍）倍濃(nong)縮洗滌液用(yong)蒸餾(liu)水30（48T的20倍）倍稀釋后備用(yong)。
4.洗滌(di)：小心揭掉(diao)封(feng)板(ban)膜，棄(qi)去液體，甩干，每孔加滿洗滌(di)液，靜置30秒后棄(qi)去，如此重復5次(ci)，拍干。
5.加酶：每孔加入酶標(biao)試劑50μl，空白孔除外。
6.溫育：操作(zuo)同2。
7.洗滌：操作同4。
8.顯色(se)：每孔先加入顯色(se)劑(ji)A50μl，再加入顯色(se)劑(ji)B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避(bi)光顯色(se)15分鐘.
9.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shi)藍色(se)(se)立轉(zhuan)黃色(se)(se)）。
10.測定(ding)：以(yi)空(kong)白空(kong)調零，450nm波長依序(xu)測量(liang)各孔的吸光度（OD值(zhi)）。測定(ding)應在加終(zhong)止液后15分鐘以(yi)內進(jin)行。
注意事項：
1．試劑盒從冷(leng)藏(zang)環(huan)境中取出(chu)應(ying)在室(shi)溫平衡15-30分鐘后(hou)方可使(shi)用，酶標包被板(ban)開封后(hou)如未用完，板(ban)條應(ying)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有(you)結晶析(xi)出，稀釋時(shi)可在(zai)水浴中加(jia)溫助溶(rong)，洗滌時(shi)不影響結果。
3．各步加(jia)樣(yang)均應使(shi)(shi)用加(jia)樣(yang)器(qi)，并經(jing)常校對其準確性，以避免試驗(yan)誤差。一次加(jia)樣(yang)時間(jian)最好控制在5分鐘(zhong)內，如標本數量多，推薦使(shi)(shi)用排槍加(jia)樣(yang)。
4．請每次測(ce)定的同時(shi)做標(biao)準(zhun)曲線(xian)，最(zui)好做復孔。如標(biao)本中待測(ce)物質(zhi)含(han)量過高（樣本OD值大于標(biao)準(zhun)品孔第一(yi)孔的OD值），請先用樣品稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)一(yi)定倍(bei)(bei)數(shu)(shu)（n倍(bei)(bei)）后(hou)再測(ce)定，計(ji)算時(shi)請最(zui)后(hou)乘(cheng)以總(zong)稀(xi)釋(shi)倍(bei)(bei)數(shu)(shu)（×n×5）。
5．封板膜只限一次(ci)性使用(yong)，以避免交叉污(wu)染。
6．底物請(qing)避(bi)光保存(cun)。
7．嚴(yan)格按照說明書(shu)的(de)操作進行，試驗結果(guo)判定(ding)必須以(yi)酶(mei)標儀讀數為準.
8．所有(you)樣品，洗滌液和各(ge)種(zhong)廢棄(qi)物都應按傳染(ran)物處理。
9．本試劑不(bu)同批(pi)號組分不(bu)得(de)混(hun)用。
11.如(ru)與英(ying)文說明(ming)書有異，以英(ying)文說明(ming)書為準。
計算：
以標(biao)準物的濃度為(wei)橫坐(zuo)(zuo)標(biao)，OD值為(wei)縱(zong)坐(zuo)(zuo)標(biao)，在坐(zuo)(zuo)標(biao)紙(zhi)上(shang)繪(hui)出(chu)標(biao)準曲線，根據樣(yang)品(pin)的OD
值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋(shi)倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準(zhun)曲線的(de)(de)直線回(hui)歸方程式，將(jiang)樣(yang)品(pin)的(de)(de)OD值代入方程式，計算出樣(yang)品(pin)濃(nong)度，再乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)
倍(bei)數，即為(wei)樣(yang)品的(de)實際濃度。
試劑盒(he)性能：
1.樣品(pin)線性回歸(gui)與預期濃度相(xiang)關系數R值為0.990以(yi)上。
2.批(pi)(pi)內與(yu)批(pi)(pi)間(jian)應分別小(xiao)于9%和11%
保存條件(jian)及有效(xiao)期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月(yue)
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