大鼠心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
大(da)鼠心肌肌鈣蛋白(bai)T(cTn-T)試(shi)劑盒含量是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)濃度的(de)標(biao)準品(pin)(pin)、未知濃度的(de)樣(yang)品(pin)(pin)加(jia)入微孔酶標(biao)板內進行(xing)檢測(ce)。先將(jiang)待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)和(he)生物(wu)素(su)標(biao)記的(de)抗體同時溫育(yu)。洗(xi)滌后，加(jia)入親和(he)素(su)標(biao)記過的(de)HRP。再經過溫育(yu)和(he)洗(xi)滌，去除未結(jie)合(he)的(de)酶結(jie)合(he)物(wu)，然后加(jia)入底(di)物(wu)A、B，和(he)酶結(jie)合(he)物(wu)同時作用(yong)。產生顏(yan)色。顏(yan)色的(de)深淺和(he)樣(yang)品(pin)(pin)中待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)的(de)濃度呈比例關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標(biao)準品用(yong)標(biao)準品稀(xi)釋液依(yi)次(ci)做倍比稀(xi)釋
標本要求：
1．標本(ben)采集后盡(jin)早進(jin)行(xing)(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按(an)相關文獻進(jin)行(xing)(xing)，提(ti)取(qu)后應盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)(xing)實驗。若不能馬(ma)上進(jin)行(xing)(xing)試驗，可將標本(ben)放(fang)于-20℃保存(cun)，但應避免(mian)反復凍融
2．不能檢測(ce)含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑(yi)制辣(la)根過氧化物酶的(de)（HRP）活性。
操作步驟:
1.加樣(yang)(yang)：標(biao)準品(pin)(pin)(pin)設(she)(she)定5個(ge)濃度(du)點10個(ge)孔(kong)(kong)，每個(ge)濃度(du)設(she)(she)定平行孔(kong)(kong)，加入50微升不(bu)同濃度(du)的標(biao)準品(pin)(pin)(pin)，空(kong)白(bai)孔(kong)(kong)設(she)(she)定1個(ge)孔(kong)(kong)加入50微升蒸餾水(shui)（空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)(kong)不(bu)加樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)及酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)，其余(yu)各步操作相同）、待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)，在酶(mei)標(biao)包被板上待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)中先(xian)加樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)稀釋液40μl，然后再加待(dai)測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)最終稀釋度(du)為5倍）。加樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)加于酶(mei)標(biao)板孔(kong)(kong)底部，盡量不(bu)觸及孔(kong)(kong)壁，輕輕晃動混(hun)勻。
2.溫(wen)育(yu)：用(yong)封板膜封板后(hou)置37℃溫(wen)育(yu)30分鐘。
3.配液：將30（48T的20倍(bei)(bei)(bei)）倍(bei)(bei)(bei)濃縮洗滌液用(yong)蒸餾(liu)水30（48T的20倍(bei)(bei)(bei)）倍(bei)(bei)(bei)稀釋后備用(yong)。
4.洗(xi)滌：小心揭掉封板膜，棄去液(ye)體，甩干，每孔加滿洗(xi)滌液(ye)，靜(jing)置30秒后棄去，如此重復5次，拍(pai)干。
5.加(jia)酶(mei)：每孔加(jia)入酶(mei)標試劑50μl，空白孔除外。
6.溫育：操作同(tong)2。
7.洗滌(di)：操作同(tong)4。
8.顯(xian)色：每孔先加(jia)(jia)入顯(xian)色劑(ji)A50μl，再加(jia)(jia)入顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻(yun)，37℃避光(guang)顯(xian)色15分鐘.
9.終(zhong)止：每孔加終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反(fan)應(ying)（此時藍色立轉(zhuan)黃色）。
10.測定(ding)：以空白(bai)空調(diao)零，450nm波長依(yi)序測量各孔的(de)吸光度（OD值(zhi)）。測定(ding)應在加(jia)終止液后15分鐘以內進行。
注意事項：
1．試(shi)劑盒(he)從冷(leng)藏環境中取出(chu)應在室(shi)溫平(ping)衡15-30分鐘(zhong)后方(fang)可使用，酶(mei)標(biao)包被板開封后如未(wei)用完，板條應裝(zhuang)入密(mi)封袋中保存。
2．濃洗滌液可(ke)能會(hui)有(you)結晶析出，稀釋時(shi)可(ke)在水浴中加(jia)溫(wen)助溶(rong)，洗滌時(shi)不影響結果。
3．各步加(jia)樣均應(ying)使用(yong)加(jia)樣器(qi)，并經常校對其準確性(xing)，以避(bi)免試驗誤差。一次(ci)加(jia)樣時間(jian)最(zui)好控制在(zai)5分鐘(zhong)內，如標本數(shu)量多，推薦使用(yong)排槍加(jia)樣。
4．請每次測(ce)定(ding)的(de)同時做(zuo)標(biao)準曲(qu)線(xian)，最好(hao)做(zuo)復孔。如標(biao)本中待測(ce)物質含量過(guo)高（樣本OD值大于標(biao)準品孔第(di)一孔的(de)OD值），請先(xian)用樣品稀釋(shi)(shi)液(ye)稀釋(shi)(shi)一定(ding)倍數（n倍）后(hou)再測(ce)定(ding)，計算(suan)時請最后(hou)乘(cheng)以總(zong)稀釋(shi)(shi)倍數（×n×5）。
5．封板(ban)膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避(bi)光(guang)保存。
7．嚴格按照(zhao)說明書的操(cao)作進行，試驗結果判定(ding)必(bi)須以酶標儀讀數為(wei)準.
8．所有樣品，洗滌(di)液和各種(zhong)廢棄物都(dou)應(ying)按傳染物處理。
9．本試劑不(bu)同(tong)批號組分不(bu)得混用。
11.如與英文(wen)說(shuo)(shuo)明(ming)書(shu)有異，以英文(wen)說(shuo)(shuo)明(ming)書(shu)為準。
計算：
以標準物的濃度為橫坐(zuo)標，OD值為縱坐(zuo)標，在坐(zuo)標紙上繪出標準曲線，根(gen)據樣品(pin)的OD
值由(you)標(biao)準曲線查出(chu)相應的濃度；再乘以稀釋倍(bei)數；或(huo)用(yong)標(biao)準物的濃度與(yu)OD值計算出(chu)標(biao)
準(zhun)曲線的直線回歸方(fang)(fang)程(cheng)式，將樣品的OD值代入方(fang)(fang)程(cheng)式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數，即為樣(yang)品的實際濃度。
試(shi)劑盒性能(neng)：
1.樣品(pin)線性回歸與預期濃(nong)度相(xiang)關系數R值為0.990以上。
2.批(pi)內與(yu)批(pi)間應分別(bie)小于9%和11%
保存條件及(ji)有效期：
1.試(shi)劑盒保存(cun)：；2-8℃。
2．有(you)效期：6個(ge)月
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