大鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
大鼠(shu)纖溶(rong)酶(mei)原(yuan)激(ji)活物(wu)(wu)抑制因子(zi)(PAI)試(shi)劑盒含量是固(gu)相夾心法酶(mei)聯免疫(yi)吸(xi)附實(shi)驗（ELISA）.已知待(dai)測物(wu)(wu)質濃度(du)的(de)標(biao)準品(pin)(pin)、未知濃度(du)的(de)樣品(pin)(pin)加入(ru)微孔酶(mei)標(biao)板內進行檢測。先將待(dai)測物(wu)(wu)質和(he)(he)生物(wu)(wu)素標(biao)記的(de)抗(kang)體同時溫育。洗(xi)滌后(hou)，加入(ru)親(qin)和(he)(he)素標(biao)記過(guo)的(de)HRP。再(zai)經過(guo)溫育和(he)(he)洗(xi)滌，去(qu)除未結(jie)合的(de)酶(mei)結(jie)合物(wu)(wu)，然后(hou)加入(ru)底物(wu)(wu)A、B，和(he)(he)酶(mei)結(jie)合物(wu)(wu)同時作用。產生顏色(se)。顏色(se)的(de)深淺和(he)(he)樣品(pin)(pin)中待(dai)測物(wu)(wu)質的(de)濃度(du)呈比例關系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標(biao)準品用(yong)標(biao)準品稀釋(shi)液依次做倍比稀釋(shi)
標本要求：
1．標本采集(ji)后盡(jin)早(zao)進(jin)(jin)行提(ti)(ti)取(qu)，提(ti)(ti)取(qu)按相關文(wen)獻進(jin)(jin)行，提(ti)(ti)取(qu)后應盡(jin)快進(jin)(jin)行實驗(yan)(yan)。若不能馬上進(jin)(jin)行試驗(yan)(yan)，可將標本放(fang)于(yu)-20℃保(bao)存(cun)，但應避免(mian)反復(fu)凍融
2．不能(neng)檢(jian)測含NaN3的(de)(de)樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(de)(de)（HRP）活性。
操作步驟:
1.加樣(yang)(yang)(yang)(yang)：標(biao)準品(pin)(pin)(pin)設定(ding)(ding)5個濃(nong)度點10個孔(kong)(kong)(kong)，每(mei)個濃(nong)度設定(ding)(ding)平(ping)行孔(kong)(kong)(kong)，加入50微(wei)升不(bu)同濃(nong)度的標(biao)準品(pin)(pin)(pin)，空白孔(kong)(kong)(kong)設定(ding)(ding)1個孔(kong)(kong)(kong)加入50微(wei)升蒸餾水(shui)（空白對照孔(kong)(kong)(kong)不(bu)加樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)及酶(mei)標(biao)試劑，其余(yu)各(ge)步操作相同）、待(dai)(dai)測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)，在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被板上待(dai)(dai)測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)中先(xian)加樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)稀釋(shi)液40μl，然(ran)后再加待(dai)(dai)測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)最終稀釋(shi)度為5倍）。加樣(yang)(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)加于(yu)酶(mei)標(biao)板孔(kong)(kong)(kong)底部，盡量不(bu)觸及孔(kong)(kong)(kong)壁，輕輕晃(huang)動混(hun)勻。
2.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸(zheng)餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備(bei)用。
4.洗滌：小心揭(jie)掉封(feng)板(ban)膜，棄(qi)去(qu)液體，甩干(gan)，每孔加滿(man)洗滌液，靜置30秒后(hou)棄(qi)去(qu)，如此重復5次，拍干(gan)。
5.加酶(mei)：每孔(kong)(kong)加入酶(mei)標(biao)試劑(ji)50μl，空(kong)白孔(kong)(kong)除外。
6.溫育：操作同2。
7.洗滌：操作同4。
8.顯(xian)(xian)色(se)(se)(se)(se)：每(mei)孔先加(jia)入(ru)顯(xian)(xian)色(se)(se)(se)(se)劑A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)(xian)色(se)(se)(se)(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避光顯(xian)(xian)色(se)(se)(se)(se)15分鐘(zhong).
9.終(zhong)止：每孔(kong)加終(zhong)止液(ye)50μl，終(zhong)止反應(ying)（此時藍(lan)色立轉黃(huang)色）。
10.測(ce)定(ding)(ding)：以空白空調零(ling)，450nm波(bo)長依序測(ce)量各孔(kong)的吸光度（OD值）。測(ce)定(ding)(ding)應在加終止(zhi)液后15分鐘以內進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環境中取出(chu)應在(zai)室(shi)溫平衡15-30分鐘后方可使用(yong)，酶標包被(bei)板開封后如(ru)未用(yong)完，板條(tiao)應裝入密封袋中保存。
2．濃洗(xi)滌(di)液(ye)可(ke)能會(hui)有結(jie)晶析(xi)出(chu)，稀釋時(shi)可(ke)在水浴中加(jia)溫(wen)助溶，洗(xi)滌(di)時(shi)不(bu)影響結(jie)果。
3．各步(bu)加樣(yang)(yang)均(jun)應使用加樣(yang)(yang)器，并經常校對其準確性，以避(bi)免(mian)試(shi)驗誤差。一次加樣(yang)(yang)時(shi)間最好控制在5分(fen)鐘內，如標本數量多，推薦(jian)使用排(pai)槍加樣(yang)(yang)。
4．請每次測定(ding)的同(tong)時(shi)做標準曲(qu)線，最好做復孔(kong)(kong)。如(ru)標本中(zhong)待測物質含量過高（樣本OD值(zhi)大(da)于(yu)標準品(pin)孔(kong)(kong)第一(yi)孔(kong)(kong)的OD值(zhi)），請先用樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)一(yi)定(ding)倍(bei)數（n倍(bei)）后再測定(ding)，計算時(shi)請最后乘以總稀(xi)釋(shi)倍(bei)數（×n×5）。
5．封板膜只限(xian)一次性使(shi)用(yong)，以避(bi)免(mian)交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書(shu)的(de)操作(zuo)進行，試驗結果判定(ding)必須以酶(mei)標儀讀數為準.
8．所有樣品(pin)，洗滌液和各種廢棄物都(dou)應按傳染物處(chu)理。
9．本試劑不同批(pi)號(hao)組(zu)分不得混(hun)用。
11.如與(yu)英(ying)文說明(ming)書有異，以英(ying)文說明(ming)書為準。
計算：
以標(biao)準物(wu)的濃度為橫坐標(biao)，OD值為縱坐標(biao)，在(zai)坐標(biao)紙上繪(hui)出標(biao)準曲線，根據(ju)樣品的OD
值由標準曲線查出相應的(de)濃(nong)度；再乘以稀釋倍數；或(huo)用(yong)標準物的(de)濃(nong)度與OD值計算(suan)出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣(yang)品(pin)的OD值代入方程式，計(ji)算出樣(yang)品(pin)濃度，再乘以稀(xi)釋
倍數(shu)，即為樣(yang)品的實際濃(nong)度。
試劑(ji)盒性能：
1.樣品線性回(hui)歸與(yu)預期(qi)濃度相關系(xi)數R值(zhi)為(wei)0.990以上。
2.批(pi)(pi)內(nei)與批(pi)(pi)間應分(fen)別小于9%和11%
保(bao)存條(tiao)件及(ji)有(you)效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(ge)月
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