豬血纖蛋白原(Fbg)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
實驗原理：
豬血纖蛋白原(Fbg)試劑盒含量是固(gu)相夾心(xin)法酶聯免疫吸附實(shi)驗（ELISA）.已知待(dai)測(ce)(ce)物(wu)質(zhi)濃度的(de)(de)(de)標(biao)準品、未(wei)知濃度的(de)(de)(de)樣品加入微孔酶標(biao)板內進行檢測(ce)(ce)。先將待(dai)測(ce)(ce)物(wu)質(zhi)和(he)(he)生(sheng)物(wu)素(su)標(biao)記(ji)的(de)(de)(de)抗體同時(shi)(shi)溫育。洗滌后(hou)，加入親和(he)(he)素(su)標(biao)記(ji)過的(de)(de)(de)HRP。再經(jing)過溫育和(he)(he)洗滌，去除未(wei)結合(he)的(de)(de)(de)酶結合(he)物(wu)，然后(hou)加入底物(wu)A、B，和(he)(he)酶結合(he)物(wu)同時(shi)(shi)作(zuo)用(yong)。產生(sheng)顏色。顏色的(de)(de)(de)深淺和(he)(he)樣品中待(dai)測(ce)(ce)物(wu)質(zhi)的(de)(de)(de)濃度呈(cheng)比例關(guan)系。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標準品用標準品稀釋液依次做倍比稀釋
標本要求：
1．標本(ben)采(cai)集后(hou)盡早進(jin)行提取(qu)(qu)(qu)，提取(qu)(qu)(qu)按相關文獻進(jin)行，提取(qu)(qu)(qu)后(hou)應盡快(kuai)進(jin)行實驗(yan)。若不能馬上(shang)進(jin)行試驗(yan)，可將(jiang)標本(ben)放于-20℃保存，但應避免(mian)反復凍融(rong)
2．不(bu)能(neng)檢測(ce)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根(gen)過氧化(hua)物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.加(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)：標準品(pin)設(she)定5個(ge)濃度(du)點10個(ge)孔(kong)，每個(ge)濃度(du)設(she)定平行(xing)孔(kong)，加(jia)入(ru)50微升不同濃度(du)的標準品(pin)，空(kong)白孔(kong)設(she)定1個(ge)孔(kong)加(jia)入(ru)50微升蒸餾(liu)水(shui)（空(kong)白對(dui)照孔(kong)不加(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)及酶標試劑(ji)，其余各步(bu)操作相同）、待測樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔(kong)，在酶標包(bao)被板上待測樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔(kong)中先(xian)加(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)稀(xi)釋液40μl，然后(hou)再(zai)加(jia)待測樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)最(zui)終稀(xi)釋度(du)為5倍）。加(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)加(jia)于酶標板孔(kong)底部，盡(jin)量不觸及孔(kong)壁，輕輕晃動混(hun)勻。
2.溫(wen)育：用封板(ban)膜封板(ban)后(hou)置37℃溫(wen)育30分(fen)鐘(zhong)。
3.配液(ye)：將30（48T的20倍(bei)）倍(bei)濃縮洗滌液(ye)用蒸餾(liu)水(shui)30（48T的20倍(bei)）倍(bei)稀釋后備(bei)用。
4.洗(xi)滌：小(xiao)心揭掉(diao)封板膜，棄(qi)去液(ye)(ye)體，甩干(gan)，每孔加滿(man)洗(xi)滌液(ye)(ye)，靜置30秒(miao)后棄(qi)去，如此重復5次(ci)，拍干(gan)。
5.加酶：每孔(kong)加入(ru)酶標試劑50μl，空(kong)白孔(kong)除外。
6.溫育：操作同2。
7.洗滌(di)：操(cao)作同(tong)4。
8.顯色：每孔(kong)先加(jia)入顯色劑A50μl，再(zai)加(jia)入顯色劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混勻，37℃避光(guang)顯色15分(fen)鐘.
9.終(zhong)止：每孔(kong)加終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應（此時藍色(se)立轉(zhuan)黃色(se)）。
10.測定(ding)(ding)：以空白(bai)空調零，450nm波長依序(xu)測量各孔(kong)的吸光度（OD值）。測定(ding)(ding)應在加終止液后15分鐘以內進行。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環境中(zhong)取出應在室溫平衡(heng)15-30分鐘后方可(ke)使用，酶(mei)標包被板開封后如未用完，板條(tiao)應裝入(ru)密封袋中(zhong)保(bao)存(cun)。
2．濃洗(xi)(xi)滌(di)液可(ke)能會(hui)有結晶析出，稀(xi)釋(shi)時可(ke)在水(shui)浴中加溫助溶，洗(xi)(xi)滌(di)時不影響(xiang)結果。
3．各(ge)步加(jia)樣(yang)(yang)均應使用(yong)(yong)加(jia)樣(yang)(yang)器(qi)，并經常校對其準確性，以(yi)避免試驗誤差。一次加(jia)樣(yang)(yang)時間最好控(kong)制在(zai)5分鐘內(nei)，如標本數(shu)量多，推薦使用(yong)(yong)排槍加(jia)樣(yang)(yang)。
4．請每次測(ce)定的同(tong)時(shi)做標準曲(qu)線，最好做復孔。如標本(ben)中待(dai)測(ce)物(wu)質含量(liang)過(guo)高（樣(yang)本(ben)OD值(zhi)(zhi)大(da)于標準品(pin)孔第一孔的OD值(zhi)(zhi)），請先用樣(yang)品(pin)稀釋液稀釋一定倍數(shu)（n倍）后再測(ce)定，計算時(shi)請最后乘(cheng)以(yi)總稀釋倍數(shu)（×n×5）。
5．封板膜只限(xian)一(yi)次性使(shi)用，以(yi)避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)的操作進行(xing)，試驗結果判(pan)定必須以酶(mei)標儀(yi)讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按(an)傳染(ran)物處理。
9．本試(shi)劑不同批號組分不得混用。
11.如與英文說(shuo)明(ming)書有異，以英文說(shuo)明(ming)書為準。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值(zhi)為縱坐標，在坐標紙上繪(hui)出標準曲(qu)線，根據樣(yang)品(pin)的OD
值由(you)標(biao)準曲線查(cha)出相應(ying)的(de)濃度(du)；再(zai)乘以稀釋倍數；或用標(biao)準物的(de)濃度(du)與(yu)OD值計(ji)算出標(biao)
準曲線的直線回(hui)歸方程(cheng)式，將(jiang)樣(yang)品(pin)的OD值代入方程(cheng)式，計算出(chu)樣(yang)品(pin)濃度，再乘以稀釋
倍數，即(ji)為(wei)樣品的實際濃度。
試劑盒(he)性能：
1.樣(yang)品線(xian)性回(hui)歸與預期濃度相關系數R值為0.990以(yi)上。
2.批(pi)內與批(pi)間應分別小于9%和11%
保存(cun)條(tiao)件及有效期：
1.試劑盒保(bao)存：；2-8℃。
2．有效期：6個月(yue)
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