小鼠磷酸化血小板衍生因子受體（PPDGFR）酶聯免疫分析
（ELISA）試劑盒使用說明書
實驗原理：
小(xiao)鼠磷酸化血小(xiao)板衍(yan)生(sheng)因子受體（PPDGFR）試劑盒含量是固相夾心(xin)法酶(mei)聯免疫吸(xi)附實驗（ELISA）.已知(zhi)待測物(wu)質濃度(du)的(de)(de)標(biao)準品(pin)、未(wei)知(zhi)濃度(du)的(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin)加(jia)(jia)入(ru)微孔酶(mei)標(biao)板內進行(xing)檢(jian)測。先將待測物(wu)質和生(sheng)物(wu)素標(biao)記的(de)(de)抗體同(tong)時溫育。洗(xi)(xi)滌后(hou)，加(jia)(jia)入(ru)親和素標(biao)記過(guo)(guo)的(de)(de)HRP。再經(jing)過(guo)(guo)溫育和洗(xi)(xi)滌，去除未(wei)結合的(de)(de)酶(mei)結合物(wu)，然后(hou)加(jia)(jia)入(ru)底物(wu)A、B，和酶(mei)結合物(wu)同(tong)時作用。產生(sheng)顏色(se)。顏色(se)的(de)(de)深(shen)淺和樣(yang)(yang)品(pin)中待測物(wu)質的(de)(de)濃度(du)呈比例關系(xi)。
試劑盒組成：
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標準品
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標準品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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顯色劑B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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終止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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濃縮洗滌液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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注：標(biao)準(zhun)品用(yong)標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液(ye)依次做倍比(bi)稀釋(shi)
標本要求：
1．標(biao)本采集(ji)后(hou)盡早(zao)進(jin)行提取(qu)，提取(qu)按相關文(wen)獻進(jin)行，提取(qu)后(hou)應盡快進(jin)行實驗(yan)。若(ruo)不能(neng)馬上進(jin)行試驗(yan)，可將標(biao)本放于-20℃保存，但(dan)應避(bi)免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的(de)樣(yang)品，因(yin)NaN3抑(yi)制辣根過(guo)氧化物酶的(de)（HRP）活性。
操作步驟:
1.加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)：標(biao)準品(pin)(pin)設定5個(ge)(ge)濃(nong)度點10個(ge)(ge)孔(kong)(kong)，每個(ge)(ge)濃(nong)度設定平行孔(kong)(kong)，加(jia)(jia)(jia)入50微(wei)升不(bu)同濃(nong)度的標(biao)準品(pin)(pin)，空白(bai)孔(kong)(kong)設定1個(ge)(ge)孔(kong)(kong)加(jia)(jia)(jia)入50微(wei)升蒸餾水（空白(bai)對照(zhao)孔(kong)(kong)不(bu)加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)及(ji)酶(mei)標(biao)試劑(ji)，其余(yu)各步操(cao)作相同）、待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)，在(zai)酶(mei)標(biao)包被板(ban)上待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)中(zhong)先加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)稀釋(shi)液(ye)40μl，然后再加(jia)(jia)(jia)待測(ce)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)最終稀釋(shi)度為5倍）。加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)將(jiang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)加(jia)(jia)(jia)于酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)(kong)底部，盡量不(bu)觸及(ji)孔(kong)(kong)壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃動混勻(yun)。
2.溫(wen)育：用封板膜封板后置37℃溫(wen)育30分鐘。
3.配液：將30（48T的20倍(bei)）倍(bei)濃縮洗(xi)滌液用(yong)蒸餾(liu)水30（48T的20倍(bei)）倍(bei)稀釋后備用(yong)。
4.洗滌(di)：小心揭掉封板膜(mo)，棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩干，每孔加滿洗滌(di)液(ye)，靜置30秒(miao)后棄(qi)去(qu)，如此重復5次(ci)，拍干。
5.加(jia)酶：每孔加(jia)入酶標(biao)試劑50μl，空白孔除外。
6.溫育(yu)：操作(zuo)同2。
7.洗滌：操(cao)作同4。
8.顯色：每孔先加入顯色劑(ji)A50μl，再加入顯色劑(ji)B50μl，輕輕震蕩混(hun)勻，37℃避光顯色15分鐘.
9.終止(zhi)：每孔(kong)加終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應(ying)（此時藍(lan)色立轉黃色）。
10.測(ce)定：以(yi)空白空調零，450nm波長依序測(ce)量各孔(kong)的吸光度（OD值(zhi)）。測(ce)定應在加終止液后15分鐘以(yi)內(nei)進行。
注意事項：
1．試劑盒(he)從(cong)冷藏環(huan)境中(zhong)取出應在室溫(wen)平(ping)衡(heng)15-30分鐘后方(fang)可使用，酶(mei)標包被板開封后如未用完(wan)，板條應裝入密封袋中(zhong)保存。
2．濃洗滌液可能(neng)會有結晶析出，稀釋(shi)時(shi)可在水浴中加(jia)溫助(zhu)溶，洗滌時(shi)不影響結果。
3．各步(bu)加(jia)樣均(jun)應使(shi)用(yong)加(jia)樣器，并經(jing)常校對其(qi)準確性(xing)，以避免試驗誤差。一次加(jia)樣時間最好(hao)控制在5分鐘內，如標本數量多，推(tui)薦使(shi)用(yong)排槍(qiang)加(jia)樣。
4．請每次測定的同時(shi)做標(biao)準曲線，最(zui)好做復(fu)孔。如標(biao)本(ben)(ben)中待測物質含量過(guo)高（樣本(ben)(ben)OD值大于標(biao)準品孔第一(yi)孔的OD值），請先用(yong)樣品稀釋液稀釋一(yi)定倍數(shu)（n倍）后(hou)再測定，計算時(shi)請最(zui)后(hou)乘以總稀釋倍數(shu)（×n×5）。
5．封板膜只(zhi)限一次性使用，以避免交叉污染(ran)。
6．底物請避光保存(cun)。
7．嚴格按照說明書的操(cao)作進行，試驗結果判(pan)定必(bi)須以酶標儀(yi)讀(du)數(shu)為準.
8．所有(you)樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(ying)按傳染物處理。
9．本試劑不(bu)同批號組分(fen)不(bu)得混用。
11.如與英文說明(ming)書(shu)有異(yi)，以英文說明(ming)書(shu)為準(zhun)。
計算：
以標準(zhun)物的濃度為(wei)橫坐標，OD值為(wei)縱坐標，在坐標紙上繪出標準(zhun)曲線，根據樣品的OD
值(zhi)由標(biao)準(zhun)曲線查出相(xiang)應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標(biao)準(zhun)物的濃度與OD值(zhi)計算(suan)出標(biao)
準(zhun)曲線的直(zhi)線回歸(gui)方(fang)程(cheng)式(shi)，將樣品的OD值(zhi)代入(ru)方(fang)程(cheng)式(shi)，計算出(chu)樣品濃度，再乘以(yi)稀釋
倍數，即為(wei)樣品的(de)實際濃度。
試劑(ji)盒(he)性能：
1.樣品線性回歸與預期(qi)濃度(du)相關系(xi)數(shu)R值(zhi)為0.990以上(shang)。
2.批(pi)內與批(pi)間應分(fen)別(bie)小于(yu)9%和11%
保存(cun)條件及有(you)效(xiao)期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期(qi)：6個月(yue)
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