分光(guang)光(guang)度計是利用物質對光的選擇性吸收的特性,以較純的單色光作為入射光,測定物質對光的吸收,從而物質進行定性或定量分析的儀器。在使用過程中常常會出現測量誤差,這些誤差又是如何產生的呢?
1、復色光對比耳定律的偏離
比耳(er)定(ding)律(lv)成(cheng)立的(de)(de)(de)(de)前(qian)提條件是(shi)人射(she)光(guang)是(shi)單(dan)色光(guang),但是(shi)精度(du)再高的(de)(de)(de)(de)儀器,即使是(shi)雙單(dan)色器的(de)(de)(de)(de)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji),也只能獲得近(jin)乎單(dan)色的(de)(de)(de)(de)光(guang),無法獲得純單(dan)色光(guang),它仍然含有狹窄(zhai)光(guang)通帶,具(ju)有復色光(guang)的(de)(de)(de)(de)性質。而復色光(guang)會導致比耳(er)定(ding)律(lv)的(de)(de)(de)(de)正或負偏離。
固定狹縫(feng)的(de)紫外分光(guang)(guang)(guang)光(guang)(guang)(guang)度計光(guang)(guang)(guang)譜帶寬(kuan)一般為1nm或2nm,可調(diao)狹(xia)縫的可以做(zuo)到0.1nm;可(ke)見分光光度計帶寬6nm、8nm,甚至十幾納米。
光(guang)譜(pu)帶寬應該是越(yue)小越(yue)好,但是隨著光(guang)譜(pu)分辨(bian)率的(de)提(ti)高,儀(yi)器(qi)的(de)靈敏度降低,所以選擇儀(yi)器(qi)時要綜合(he)考慮各種條件的(de)影響。當(dang)溶液濃度較小且單色光(guang)較純時,可近似認為(wei)符合(he)比耳定(ding)律。
2、雜散光的影響
雜散光(guang)是指進人檢(jian)測器的處于待(dai)測波長光(guang)譜帶寬范圍外的其他波長組(zu)分,它是光(guang)譜測量中誤差的主要來源。
產生原因有:分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計的(de)色(se)散元(yuan)件(jian)、反射(she)鏡(jing)、透鏡(jing)及單色(se)器(qi)內壁灰塵等。在(zai)分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計工作波段邊緣(yuan)波長處,由于單色(se)器(qi)透光(guang)(guang)率、光(guang)(guang)源(yuan)輻射(she)強度、檢測器(qi)靈敏度都(dou)較低,雜散光(guang)(guang)的(de)影響更為顯著(zhu)。
雜散光(guang)(guang)限制儀器的分析上限可引起嚴重的測量誤(wu)差,實際工(gong)作(zuo)中,在(zai)定(ding)量分析時,一般在(zai)吸(xi)收峰或其附近處(chu)(chu)測量樣品(pin)吸(xi)光(guang)(guang)度,如(ru)果在(zai)分析波長處(chu)(chu)含有雜散光(guang)(guang),這時樣品(pin)的透(tou)光(guang)(guang)率較(jiao)小(xiao),而雜散光(guang)(guang)大部分透(tou)過,使(shi)測量吸(xi)光(guang)(guang)度低(di)于真實吸(xi)光(guang)(guang)度。
3、儀器噪聲對測定的影響
儀器噪聲也是(shi)儀器的(de)(de)一個重要(yao)指標,它表征儀器做稀溶液的(de)(de)能力。是(shi)疊加在待測量(liang)的(de)(de)分析信號中的(de)(de)不需要(yao)的(de)(de)信號,掃描100%T和0%T線,可觀察到分光光度(du)計的(de)絕(jue)對(dui)噪聲水平,如果儀器噪聲較大,會掩蓋較小(xiao)的(de)測(ce)量信號,一般用噪音(yin)的(de)二倍來(lai)表(biao)示(shi)儀器的(de)靈敏度(du)。
4、波長和吸光度準確度
樣(yang)品的(de)(de)(de)每(mei)一(yi)個值都是在一(yi)定(ding)的(de)(de)(de)波長(chang)下測得的(de)(de)(de),如果波長(chang)誤差很大,測出的(de)(de)(de)值肯定(ding)不準(zhun)。吸(xi)光(guang)度(du)準(zhun)確度(du)也(ye)是用戶對(dui)儀器的(de)(de)(de)直接要求,更應引起足夠的(de)(de)(de)重視。
國(guo)家計量檢定(ding)規程規定(ding)雙光(guang)束紫外可(ke)見分光(guang)光(guang)度計透射比準確度為A級(ji)士0.6%,B級土1.0%。
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